【摘 要】
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将编码平颏海蛇磷脂酶A2的基因(PLA2-9)分别克隆于硫氧环蛋白基因融合表达载体pThioHisC和pTRX的HP-trxA和trxA基因的3′末端,构建符合读码框的融合表达载体pThioHisC-PLA2和
【机 构】
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中山大学生命科学学院生化系,中国科技大学生命科学院
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将编码平颏海蛇磷脂酶A2的基因(PLA2-9)分别克隆于硫氧环蛋白基因融合表达载体pThioHisC和pTRX的HP-trxA和trxA基因的3′末端,构建符合读码框的融合表达载体pThioHisC-PLA2和pTRX-PLA2.25℃下经IPTG诱导,PLA2融合蛋白在两种原核系统中均能获得较高表达,但PLA2在pTRX系统下的表达量和蛋白溶解性优于pThioHisC系统.将两种系统下的表达产物进行金属螯合亲和层析纯化,Trx-PLA2融合蛋白的纯度可达85%以上,而HP-Trx-PLA2不表现出对介质的亲和性,难以得到纯化.由此,将pTRX-PLA2载体系统确立为进一步大量表达和纯化的载体系统.
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