【摘 要】
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【目的】构建1型鸭肝炎病毒(DHV)的感染性克隆,用于研究其基因组的结构与功能。【方法】用RT-PCR方法扩增出覆盖整个1型鸭肝炎病毒CL株基因组3个忠实性片段,并按顺序组装进载
【机 构】
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山东省农业科学院家禽研究所山东省禽病诊断与免疫重点实验室;
【基金项目】
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山东省自然科学基金(Y2008D55)~~
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【目的】构建1型鸭肝炎病毒(DHV)的感染性克隆,用于研究其基因组的结构与功能。【方法】用RT-PCR方法扩增出覆盖整个1型鸭肝炎病毒CL株基因组3个忠实性片段,并按顺序组装进载体pBR322中,获得全长cDNA克隆(BR-CL)。将BR-CL在体外转录出的RNA转染鸭胚肾细胞,并传至第6代,利用RT-PCR方法和间接免疫荧光试验进行鉴定。将获得的子代病毒(CL-R)在SPF鸡胚上传代,观察鸡胚死亡及胚体病变情况。通过胶体金免疫电镜观察子代病毒粒子的形态。【结果】RT-PCR、间接免疫荧光和胶体金免疫电镜均检测到了子代病毒。通过感染SPF鸡胚试验发现,子代病毒能致死鸡胚。【结论】本研究成功构建出具有感染性的DHV全长cDNA克隆,这在国内外还是首次报道,为进一步揭示DHV基因组的结构和功能提供了良好的技术平台。
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