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【摘要】目的创建测定保健食品中水苏糖的含量方法。方法色谱柱Agilent zorbax NH2（4.6 mm×250mm，5μm），柱温 25 ℃；流动相乙腈-水（69：31），流速1.0 mL·min-1；示差折光检测器，内部温度35℃。结果水苏糖的线性范围为2.06-20.6μg；加样回收率（n =5）为97.68%。结论本方法简便、灵敏、准确，可用于保健食品中水苏糖的含量测定和产品质量控制。
【关键词】高效液相示差折光法；水苏糖；含量测定
水苏糖是具有保健功能的大豆低聚糖的组成成分之一，且被称为大豆低聚糖的主要功效成分。水苏糖为四糖，是棉子糖的半乳糖用a-1，6 糖苷键和半乳糖相连接，因此水苏糖是低聚糖，它也是半乳糖类的一种，属于非还原糖。大豆低聚糖的主要成分是水苏糖，它的生理作用主要是通过加快双歧杆菌的繁殖速度以及增加其繁殖量，进而去调节肠道保持菌群的平衡[1]。因人体内将大豆低聚糖分解的消化酶 a-D-半乳糖苷酶较为稀少，因此他们可以避免被分解吸收从而直接到达大肠内被双歧菌用于增殖，是双歧杆菌的有效增殖因子。除此之外大豆低聚糖还具有对身体有益的多项生理功能如抑制病原菌、保护肝脏、降低血清胆固醇、降血压、增强人体免疫力等 [2]。在我国，市场上出现很多含水苏糖或大豆低聚糖类成分的提取物、这些保健食品有的进口有的国产名目不一，质量也良莠不齊。现在，对保健食品里大豆低聚糖含量的测定方法文献报道不多，总结起来主要的方法包括化学分析、层析、气相色谱以及高效液相色谱这四种[2-3]，就这四种方法而言，气相色谱法以及高效液相色谱法测定结果较为精准。将糖通过衍生化的方法转换成为可挥发的成分后再测定，这种方法我们称之为气相色谱法，然而用这种方法进行实验操作起来比较麻烦。相对来说高效液相色谱法操作起来更为便捷，已有文献对此报道[4-8]，但关于水苏糖的含量测定方法较为缺乏。我们为了更好地对一个产品进行评价以及更好的把握好质量关，故而采集了在国内市场上较为常见的几种含大豆低聚糖的保健食品，用RP-HPLC-RID的方法对产品中的水苏糖进行测定，得到了令人满意的结果。
1仪器与试剂的选取
我们采用Waters 515高效液相色谱仪和2414示差折光检测器进行实验。水苏糖（批号：CRS52837）由（北京百灵威科技有限公司）所生产，其纯度在99%以上。实验中除乙腈为色谱纯以外其他均为分析纯，使用纯净水，过Millipore 0.22μm滤膜。共在五个市场常见含水苏糖保健食品用作实验中。
2色谱条件的设定
色谱柱Agilent zorbax NH2（4.6 mm×150mm，5μm），柱温设定25 ℃；流速为1.0mL·min-1；流动相通过流动相水-乙腈（31﹕69）等度来对其洗脱，设示差折光检测器内部温度为35℃；理论塔板数以蔗糖计算高于2200。色谱图见图1。
3溶液的制备
3.1取一定量的水苏糖对照品，称取过程要保证精准度，然后将流动相溶液加入制备成水苏糖1.03 mg·ml-1溶液，这就是我们实验中要用到的对照品溶液。
3.2取样品各0.5g置于25ml量瓶中，称取过程也要保证精准。将流动相溶液加入并时期充分均匀混合，再用0.45μm的微孔滤膜进行过滤，这就是我们实验中要用到的供试品溶液。
4方法与结果的分析
4.1线性关系考察分别将2.0，4.0，8.0，10.0，15.0μL，20.0μL的对照品溶液依次注入到液相色谱仪中，然后测量峰面积。峰面积作为纵坐标，浓度作为横坐标，计算出的回归方程为Y=1.293×105 X-183.5，r=0.9993。这就说明水苏糖在2.06-20.6μg范围内具备良好的线性关系。
4.2稳定性试验取供试品溶液10μL，吸取过程保证精准，每2小时.进样1次，6次之后测量峰面积，数据显示水苏糖的RSD为0.92%，这也就说明12h内测定有稳定的结果。
4.3精密度实验取对照品溶液10μL，吸取过程保证精准，注入液相色谱仪然后测量峰面积，数据显示水苏糖的RSD为（n=5）0.86%，这也就说明仪器十分精密。
4.4最低检测限和定量限当信噪比为3：1时经测量水苏糖的最低检测限是0.96μg。当信噪比10：1作为定量限进行测量时，得出水苏糖的定量限是2.86μg。
4.5重复性实验将同一样品取出5份，用样品处理法依次测定3种成分的含量。结果水苏糖的RSD为1.1%，实验数据说明该方法有良好的重复性。
4.6回收率试验此试验我们用的是加样回收率的方法。现有明确含量的1号样品，我们分别精确地秤取出0.25g共9份，平均分为三组，按高、中、低3个水平依次精确地加入一定量对照品，然后进行供试品溶液制备的操作，数据显示水苏糖的回收率是97.68%（RSD 1.56%）。这也就说明通过这种方法对保健食品中的水苏糖成分进行测量，有良好的回收率。
4.7样品测定依上文提到的方法制备样品溶液并对其测量，5种含水苏糖保健食品（样品是不同企业市售的产品，依次编号1，2，3，4，5）样品的测定结果，见表1。
5讨论
5.1实验结果显示用流动相是乙晴-水（69 ：31），分别设定柱温25℃、流速1.0 mL·min-1 不仅可以使水苏糖与其他可溶性糖进行有效的分离，而且还能缩短他的保留时间，通常一个样品完成时间不会超过二十分钟。
5.2这次的实验主要是为了探究含水苏糖的保健食品功效成分含量的测量方法，为该类产品的质量掌控划定统一标准。由实验结果看来，由不同商家生产的同类产品水苏糖的含量有着极大的差距，这也就反映出现在市场上此类产品的质量参差不齐的情况。此外，含量测定方法学实验结果显示，采用这种方法进行实验操作起来简单且测定结果精确，重复性较好，可将此方法在含水苏糖的保健食品的质量掌控上多多加以应用。
参考文献
[1]韩德权，白志明.大豆低聚糖的物性和保健功能.黑龙江粮油科技，1997，（4）：56.
[2]陈孝署.浅谈大豆低聚糖.中国保健营养，2004，增刊（S1）：28.
[3]薛连海.气相色谱法测定大豆中低聚糖含量.分析化学，2003，31（3）：382.
[4]郝岩平，姜金斗，杨秀茹.HPLC 法测定食品中大豆低聚糖的含量.中国甜菜糖业，2003，1 ：8.
[5]泰根顺，陈桂茹，常风启.大豆及其制品中大豆低聚糖的测定方法.中国卫生工程学报，2002，1（2）：94.
[6]马莺，骆承痒，吴昊.HPLC 法测定食品中大豆低聚糖的含量.分析化学，1999，27（3）：367.
[7]甘宾宾.高效液相色谱法测定低聚果糖[J].广西化工，1999，28（3）：44-45.
[8]张志国，生庆海，卢彦君.HPLC 法检测低聚果糖的研究[J].食品科学，2002，23（8）：221-222.
【关键词】高效液相示差折光法；水苏糖；含量测定
水苏糖是具有保健功能的大豆低聚糖的组成成分之一，且被称为大豆低聚糖的主要功效成分。水苏糖为四糖，是棉子糖的半乳糖用a-1，6 糖苷键和半乳糖相连接，因此水苏糖是低聚糖，它也是半乳糖类的一种，属于非还原糖。大豆低聚糖的主要成分是水苏糖，它的生理作用主要是通过加快双歧杆菌的繁殖速度以及增加其繁殖量，进而去调节肠道保持菌群的平衡[1]。因人体内将大豆低聚糖分解的消化酶 a-D-半乳糖苷酶较为稀少，因此他们可以避免被分解吸收从而直接到达大肠内被双歧菌用于增殖，是双歧杆菌的有效增殖因子。除此之外大豆低聚糖还具有对身体有益的多项生理功能如抑制病原菌、保护肝脏、降低血清胆固醇、降血压、增强人体免疫力等 [2]。在我国，市场上出现很多含水苏糖或大豆低聚糖类成分的提取物、这些保健食品有的进口有的国产名目不一，质量也良莠不齊。现在，对保健食品里大豆低聚糖含量的测定方法文献报道不多，总结起来主要的方法包括化学分析、层析、气相色谱以及高效液相色谱这四种[2-3]，就这四种方法而言，气相色谱法以及高效液相色谱法测定结果较为精准。将糖通过衍生化的方法转换成为可挥发的成分后再测定，这种方法我们称之为气相色谱法，然而用这种方法进行实验操作起来比较麻烦。相对来说高效液相色谱法操作起来更为便捷，已有文献对此报道[4-8]，但关于水苏糖的含量测定方法较为缺乏。我们为了更好地对一个产品进行评价以及更好的把握好质量关，故而采集了在国内市场上较为常见的几种含大豆低聚糖的保健食品，用RP-HPLC-RID的方法对产品中的水苏糖进行测定，得到了令人满意的结果。
1仪器与试剂的选取
我们采用Waters 515高效液相色谱仪和2414示差折光检测器进行实验。水苏糖（批号：CRS52837）由（北京百灵威科技有限公司）所生产，其纯度在99%以上。实验中除乙腈为色谱纯以外其他均为分析纯，使用纯净水，过Millipore 0.22μm滤膜。共在五个市场常见含水苏糖保健食品用作实验中。
2色谱条件的设定
色谱柱Agilent zorbax NH2（4.6 mm×150mm，5μm），柱温设定25 ℃；流速为1.0mL·min-1；流动相通过流动相水-乙腈（31﹕69）等度来对其洗脱，设示差折光检测器内部温度为35℃；理论塔板数以蔗糖计算高于2200。色谱图见图1。
3溶液的制备
3.1取一定量的水苏糖对照品，称取过程要保证精准度，然后将流动相溶液加入制备成水苏糖1.03 mg·ml-1溶液，这就是我们实验中要用到的对照品溶液。
3.2取样品各0.5g置于25ml量瓶中，称取过程也要保证精准。将流动相溶液加入并时期充分均匀混合，再用0.45μm的微孔滤膜进行过滤，这就是我们实验中要用到的供试品溶液。
4方法与结果的分析
4.1线性关系考察分别将2.0，4.0，8.0，10.0，15.0μL，20.0μL的对照品溶液依次注入到液相色谱仪中，然后测量峰面积。峰面积作为纵坐标，浓度作为横坐标，计算出的回归方程为Y=1.293×105 X-183.5，r=0.9993。这就说明水苏糖在2.06-20.6μg范围内具备良好的线性关系。
4.2稳定性试验取供试品溶液10μL，吸取过程保证精准，每2小时.进样1次，6次之后测量峰面积，数据显示水苏糖的RSD为0.92%，这也就说明12h内测定有稳定的结果。
4.3精密度实验取对照品溶液10μL，吸取过程保证精准，注入液相色谱仪然后测量峰面积，数据显示水苏糖的RSD为（n=5）0.86%，这也就说明仪器十分精密。
4.4最低检测限和定量限当信噪比为3：1时经测量水苏糖的最低检测限是0.96μg。当信噪比10：1作为定量限进行测量时，得出水苏糖的定量限是2.86μg。
4.5重复性实验将同一样品取出5份，用样品处理法依次测定3种成分的含量。结果水苏糖的RSD为1.1%，实验数据说明该方法有良好的重复性。
4.6回收率试验此试验我们用的是加样回收率的方法。现有明确含量的1号样品，我们分别精确地秤取出0.25g共9份，平均分为三组，按高、中、低3个水平依次精确地加入一定量对照品，然后进行供试品溶液制备的操作，数据显示水苏糖的回收率是97.68%（RSD 1.56%）。这也就说明通过这种方法对保健食品中的水苏糖成分进行测量，有良好的回收率。
4.7样品测定依上文提到的方法制备样品溶液并对其测量，5种含水苏糖保健食品（样品是不同企业市售的产品，依次编号1，2，3，4，5）样品的测定结果，见表1。
5讨论
5.1实验结果显示用流动相是乙晴-水（69 ：31），分别设定柱温25℃、流速1.0 mL·min-1 不仅可以使水苏糖与其他可溶性糖进行有效的分离，而且还能缩短他的保留时间，通常一个样品完成时间不会超过二十分钟。
5.2这次的实验主要是为了探究含水苏糖的保健食品功效成分含量的测量方法，为该类产品的质量掌控划定统一标准。由实验结果看来，由不同商家生产的同类产品水苏糖的含量有着极大的差距，这也就反映出现在市场上此类产品的质量参差不齐的情况。此外，含量测定方法学实验结果显示，采用这种方法进行实验操作起来简单且测定结果精确，重复性较好，可将此方法在含水苏糖的保健食品的质量掌控上多多加以应用。
参考文献
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[3]薛连海.气相色谱法测定大豆中低聚糖含量.分析化学，2003，31（3）：382.
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[6]马莺，骆承痒，吴昊.HPLC 法测定食品中大豆低聚糖的含量.分析化学，1999，27（3）：367.
[7]甘宾宾.高效液相色谱法测定低聚果糖[J].广西化工，1999，28（3）：44-45.
[8]张志国，生庆海，卢彦君.HPLC 法检测低聚果糖的研究[J].食品科学，2002，23（8）：221-222.