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摘要 [目的]評价增效“病毒克”颗粒剂对人工感染新城疫病毒（newcastle disease virus，NDV）肉仔鸡免疫功能的影响。[方法]选取1日龄的健康AA肉仔鸡250只，随机分为5组。21日龄时，除阴性对照组（Ⅳ组）外，其余各组均用NDV强毒株攻毒，各治疗组（I～Ⅲ组）在22～25日龄饮水中分别添加0.5%、1.0%和2.0%的增效“病毒克”颗粒剂，Ⅳ、Ⅴ组（阳性对照组）不用药。在攻毒前1 d和攻毒后1、3、7、15 d，观察血清免疫球蛋白及新城疫抗体效价的变化;试验结束时，每组随机屠宰15只，取胸腺、法氏囊和脾脏，计算免疫器官指数。[结果]Ⅱ、Ⅲ组血清IgG 含量在攻毒后15 d与Ⅰ、Ⅳ、Ⅴ组差异极显著 （P<0.01）;Ⅱ、Ⅲ组血清IgA含量在攻毒后3、7 d均极显著高于Ⅳ、Ⅴ组（P<0.01），以2.0%治疗组效果最佳;各组间血清中IgM 含量无显著差异（P>0.05）。Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组新城疫抗体效价在攻毒后7、15 d均极显著高于Ⅴ组（P<0.01）;与Ⅳ组相比，Ⅰ、Ⅱ和Ⅴ组脾脏指数、胸腺指数和法氏囊指数均显著升高（P<0.05）;Ⅲ组法氏囊指数显著升高（P<0.05），脾脏指数和胸腺指数也有所升高但差异不显著（P>0.05）。[结论]饮水中添加1.0%～2.0%的增效“病毒克”颗粒剂能明显增加鸡体的免疫功能和抗NDV能力。
关键词 增效“病毒克”;新城疫病毒;免疫球蛋白;抗体效价;免疫器官指数
中图分类号 S852.65;S859 文献标识码 A
文章编号 0517-6611（2020）20-0083-04
doi：10.3969/j.issn.0517-6611.2020.20.023
Effects of Synergistic “Bingduke” Granules on Immunology Function of Broilers Artificially Infected by NDV
HAO Song-hua，WANG Xu-zhen （Shanxi College of Animal Science and Veterinary Medicine，Taiyuan，Shanxi 030024）
Abstract [Objective] To evaluate the effects of Synergistic “Bingduke” Granules on the immune function of broilers artificially infected by newcastle disease virus（NDV）.[Method] Two hundred and fifty healthy AA broilers （1 day-old） were selected and randomly divded into five groups.At 21-day-old，broilers in all groups were challenged by highly virulent strain of NDV except negative group （Ⅳ）.0.5%，1.0% and 2.0% Synergistic “Bingduke” Granules were added in the drinking water of 22-25 day-old broilers in I，Ⅱ，Ⅲ treatment groups，and no drug was administrated in Ⅳ group，Ⅴ group（positive control group）.The changes of serum immunoglobulin and ND antibody titer were observed at 1 d before virus challenge and 1，3，7 and 15 d after virus challenge.At the end of the test，10 chicken randomly selected from each group were slaughtered，and thymus，bursa and spleen were quickly excised，and the immune organ index was calculated.[Result] IgG content in the serum in Ⅱ and Ⅲ groups had extremely significant difference with that in Ⅰ，Ⅳ and Ⅴ groups at 15 d after virus challenge（P<0.01）.At 3，7 d after virus challenge，IgA content in Ⅱ and Ⅲ groups was extremely significantly higher than that of Ⅳ，Ⅴ group （P<0.01）， IgA content in Ⅲ group（adding 2.0% Synergistic “Bingduke” Granules ） were the highest.IgM content in the serum had no significant difference among all groups（P>0.05）.NDV antibody titer inⅠ，Ⅱ and Ⅲ groups was extremely significantly higher than that of Ⅴ group after virus challenge 7 and 15 d（P<0.01）.Compared with Ⅳ group，the spleen index，thymus index and bursa index in Ⅰ，Ⅱ and Ⅴ groups were significantly increased （P< 0.05）;The bursa index in Ⅲ group significantly increased （P<0.05），the spleen index and thymus index in Ⅲ group increased （P> 0.05）.[Conclusion] Adding 1.0%-2.0% Synergistic “Bingduke” Granules in the drinking water could significantly improve the immune function and the resistance of broilers to NDV. Key words Synergistic “Bingduke” Granules;Newcastle disease virus;Blood immune globulin;Antibody titer;Immune organ index
新城疫是由新城疫病毒（newcastle disease virus，NDV）引起鸡的急性高度传染性疾病，临床特征表现为呼吸困难、下痢、神经紊乱、浆膜和黏膜出血 [1]。目前对该病尚无特效的治疗方法，国内外均采用接种疫苗的方法进行预防，但仍有免疫鸡群发生非典型新城疫的报道 [2]。增效“病毒克”颗粒剂是在原“病毒克”组方的基础上增加口蘑，用水提醇沉后加辅料制成纯中药的抗病毒制剂 [3]。口蘑为河北省张家口坝上地区特产，富含口蘑多糖，具有免疫调节、抗应激和抗肿瘤等多种生物活性 [4]，在兽医临床中的研究和使用报道较少。笔者通过分析肉仔鸡血清新城疫抗体效价、免疫球蛋白水平和免疫器官指数的变化，研究不同剂量增效“病毒克”颗粒剂对肉仔鸡人工感染NDV免疫功能的影响，旨在为减抗替抗、健康养殖和禽产品提质增效提供科学依据。
1 材料与方法
1.1 药物与毒株
增效“病毒克”颗粒剂，由板蓝根、黄芩、金银花、黄花、黄连等多种中药组成;鸡免疫球蛋白（IgA、IgG、IgM）ELISA试剂盒，购自爱德士/IDEXX;新城疫病毒F48E9株，由中国兽医药品监察所生产，使用前在SPF鸡胚（购自北京梅里亚维通实验动物技术有限公司）中传代复壮，测得半数感染量（EID 50）为5×10 -4.71/mL;新城疫抗原和新城疫阳性血清，购自中国兽医药品监察所。
1.2 试验动物分组及处理
250只1日龄健康AA肉仔鸡（北京家禽育种有限公司提供），在严格消毒条件下常规饲养管理。21 d时，翅静脉采血检测ND-HI抗体，将母源抗体阴性鸡随机分为低剂量组（Ⅰ）、中剂量组（Ⅱ）、高剂量组（Ⅲ）、阴性对照组（Ⅳ）和阳性对照组（Ⅴ），每组50只。根据预试验结果，除Ⅳ组外，其余组鸡胸肌注射接种NDV稀释液0.2 mL（20倍EID 50），Ⅳ组注射等量的生理盐水并单房隔离饲养。Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组于22～25日龄分别按饮水中含增效“病毒克”颗粒剂0.5%、1.0%、2.0%的剂量给药，连用4 d，Ⅳ、Ⅴ组饮水中不加药，试验期共36 d。
1.3 饲料组成与饲养水平 饲料由山西正大饲料有限公司提供，饲料组成及营养水平见表1。
1.4 血清制备及免疫球蛋白测定
攻毒前1 d以及攻毒后1、 3、7、15 d，每组随机抽取10只鸡，分别翅静脉采血，待血液凝固后，3 000 r/min离心15 min，分离血清并保存于 -20 ℃ 冰箱中，备测。参照ELISA试剂盒说明书，使用酶标仪测定血清中各免疫球蛋白水平。
1.5 ND抗体效价测定
分别于20、22、25、32和36 d，每组随机抽取15只鸡，分别翅静脉采血，分离血清，采用红细胞凝集抑制（HI）试验对样品进行ND抗体测定，将完全抑制4个HAU抗原的血清最高稀釋倍数作为HI抗体效价，以log2X表示 [5]。
1.6 雏鸡免疫器官指数测定 36 d试验结束时，每组随机抽取15只鸡，称重后屠宰，分别摘取胸腺、脾脏和法氏囊，去除周围附着的组织和脂肪，并用滤纸吸去血渍，称其湿重，按以下公式计算各免疫器官指数：免疫器官指数=免疫器官质量/鸡体质量×100%。
1.7 数据处理 试验数据均以 x±SD表示，使用SPSS19.0统计软件中的ANOVA进行方差分析，采用邓肯氏法进行多重比较。
2 结果与分析
2.1 增效“病毒克”对人工感染NDV肉仔鸡血清中IgG、IgA和IgM含量的影响
Ⅰ～Ⅲ组在攻毒后1 d，血清IgG、IgA和IgM含量较Ⅳ组均有所升高。攻毒后1、3、7 d，Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组血清IgG含量均高于Ⅴ组，但差异均不显著（P> 0.05）;攻毒后15 d，Ⅱ、Ⅲ组极显著高于Ⅰ、Ⅳ和Ⅴ组（P<0.01）。攻毒后3 d，Ⅱ、Ⅲ组IgA含量极显著高于Ⅰ、Ⅳ、Ⅴ组（P<0.01）;攻毒后7 d，Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组IgA含量亦极显著高于Ⅳ、Ⅴ组（P<0.01）;攻毒后 15 d，各组IgA含量基本趋于一致。在整个试验期内，各增效“病毒克”治疗组（Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ）、阴性对照组（Ⅳ）及阳性对照组（Ⅴ）血清IgM含量差异均不显著（P>0.05），表明增效“病毒克”颗粒剂对NDV接种肉仔鸡血清中IgM含量的影响不明显（表2）。
2.2 增效“病毒克”颗粒剂对人工感染NDV肉仔鸡ND抗体效价的影响
攻毒后3 d，各治疗组才产生ND抗体，各治疗组（Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ）ND抗体效价均高于阳性对照组（Ⅴ），但差异不显著（P>0.05）;在攻毒后7 d，各治疗组（Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ）与Ⅳ、Ⅴ组差异极显著（P<0.01）。各治疗组在攻毒后3 d产生新城疫抗体，并逐渐增加，呈现明显的量效关系（表3）。
2.3 增效“病毒克”颗粒剂对人工感染NDV肉仔鸡免疫器官指数的影响
所有屠宰的试验肉仔鸡免疫器官肉眼观察未见异常。与Ⅳ组相比，Ⅰ、Ⅱ、Ⅴ组脾脏指数、胸腺指数和法氏囊指数显著升高（P<0.05）;Ⅲ组法氏囊指数显著高于Ⅳ组 （P<0.05），脾脏指数和胸腺指数也高于Ⅳ组，但差异不显著 （P>0.05）（表4）。
3 讨论
3.1 增效“病毒克”颗粒剂具有提高NDV感染鸡免疫球蛋白的作用
以金银花等清热解毒药为主药，以黄芪、甘草等扶正药为辅药，筛选出具有抗病毒功效的中药复方“病毒克”散剂，进一步研究开发为颗粒剂，临床应用效果良好。郑雪花等 [6]研究表明中药复方“病毒克”颗粒剂与 NDV 感作和不感作在鸡胚水平上均对 NDV有明显的抑制作用，即延长鸡胚存活时间和降低尿囊液病毒血凝价;杨玉成等 [7]研究证实中药复方“病毒克”颗粒剂与NDV 以3种不同的作用方式在细胞水平上均对NDV有明显的抑制作用;尹秀玲等 [8]研究表明中药复方“病毒克”颗粒剂能显著提高人工感染NDV鸡外周血IgG、IgA、IgM含量。 免疫球蛋白主要存在于血清中，具有抗病毒、抗菌、抗外毒素等多种生物活性功能。家禽体内含有IgG、IgA和IgM 3种重要的免疫球蛋白 [9]。IgG在血液中含量最高，是B淋巴细胞活化后产生，具有抗细菌、抗病毒和抗毒素及调理、凝集和沉淀抗原的作用，在抗体介导的防卫机理中占主要地位;IgM是由浆细胞完整分泌，常存在于血液内，是体液免疫反应仅次于IgG的抗体，是抗病原微生物感染的先锋抗体，在抗感染早期发挥着重要作用 [10];IgA是黏膜免疫的主要抗体，在保护呼吸道、肠道、泌尿生殖道、乳腺和眼睛等黏膜抵抗病原微生物和有害物质的入侵，作为抗感染的最初屏障起着十分重要的作用 [4]。因此，检测特异性IgG、IgA 、IgM抗体水平是评价机体免疫水平的重要指标。
该试验中各增效“病毒克”颗粒剂治疗组血清IgG含量均高于阳性对照组，在攻毒15 d时，2.0%和1.0%治疗组明显高于0.5%治疗组、阴性和阳性对照组（P<0.01），说明增效“病毒克”颗粒剂具有提高NDV感染肉鸡血清IgG含量的作用，对 NDV具有调理、凝集和沉淀的作用，从而增强机体的防卫机能。攻毒后3 d，2.0%和1.0%治疗组IgA含量极显著高于0.5%治疗组、阴性对照组、阳性对照组（P<0.01）;攻毒后 7 d，各治疗组IgA含量亦明显高于阳性对照组、阴性对照组，2.0%治疗组IgA含量明显高于1.0%治疗组;攻毒后15 d，各组IgA含量基本趋于一致。这说明增效“病毒克”颗粒剂具有提高 NDV感染肉鸡血清IgA含量的作用，对于保护呼吸道、肠道、泌尿生殖道、乳腺和眼睛抵抗新城疫病毒的入侵方面起关键作用。
3.2 增效“病毒克”能提高NDV感染鸡ND抗体效价
已有的研究表明，口蘑多糖及某些中草药复方通过刺激B细胞，使其分化增殖转变为浆细胞，分泌抗体从而增强动物机体体液免疫功能 [11]。血清中 HI抗体水平的高低在一定程度上可反映机体对疾病的抵抗能力。该试验通过给试验肉仔鸡人工接种NDV-F48E9株后，检测血清中抗NDV特异性HI抗体效价水平，研究增效“病毒克”颗粒剂对肉仔鸡体液免疫功能的影响。结果表明，各治疗组在攻毒后3 d才产生新城疫抗体，各治疗组ND抗体效价在攻毒3 d后均高于阳性对照组（P>0.05），且在攻毒后7 d各治疗组（Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ）与Ⅳ、Ⅴ组差异极显著（P<0.01），说明增效“病毒克”能促进NDV感染肉仔鸡的体液免疫功能，且呈现一定的量效关系。
3.3 增效“病毒克”对肉仔鸡免疫器官指数的影响
胸腺、脾脏和法氏囊，是鸡体内参与细胞免疫和体液免疫的重要器官，其发育状态能在一定程度上反映出机体免疫系统的状态，因此常用免疫器官指数作为衡量机体免疫功能的直观指标 [12]。在正常动物机体内，免疫器官重量增加为免疫功能增强的表现，而免疫器官重量降低提示免疫功能降低或抑制，如长期摄入过量的DON可以降低雏鸡的免疫器官指数和免疫功能 [13]。该试验结果表明，阳性对照组、低、中剂量组脾脏指数、胸腺指数和法氏囊指数显著高于阴性对照组 （P<0.05）;值得注意的是，阳性对照组脾脏指数、胸腺指数和法氏囊指数显著高于阴性对照组（P<0.05），可能与病毒感染造成免疫器官一定程度的出血、水肿及增生等组织病变有关;低、中、高剂量的增效“病毒克”颗粒剂一方面可以刺激免疫器官中T、B淋巴细胞增生，另一方面也对受损免疫器官具有修復的功效。关于增效“病毒克”颗粒剂对NDV感染肉仔鸡免疫器官组织学变化的详细机理有待日后进一步深入 研究。
4 结论
饮水中添加不同剂量增效“病毒克”颗粒剂具有提高NDV感染肉仔鸡ND抗体效价和外周血液中IgG和IgA含量的作用，从而增强机体对新城疫病毒的体液免疫功能，拮抗和修复NDV对鸡体各组织器官造成的损伤和破坏。
参考文献
[1]
蔡宝祥.家畜传染病学[M].4版.北京：中国农业出版社，2001.
[2] 黄道成.免疫鸡群发生非典型新城疫[J].养禽与禽病防治，2016（2）：33-34.
[3] 杨玉成.中药病毒克颗粒剂的研制及其抗NDV的药理学研究[D].北京：中国农业大学，2006.
[4] 王玉俊，刘开阳，孙黎，等.口蘑多糖对小白鼠免疫功能的影响[J].张家口医学院学报，1996，13（2）：17-18.
[5] 阴天榜，刘兴友.家禽免疫学[M].北京：中国农业科技出版社，1999： 260-269.
[6] 郑雪花，田勇，杨玉成，等.增效“病毒克”颗粒剂对NDV在鸡胚中增殖的影响[J].黑龙江畜牧兽医，2008（9）：94-95.
[7] 杨玉成，田勇，乔健，等.“病毒克”颗粒剂对NDV在鸡胚成纤维细胞中增殖的影响[J].中国农业大学学报，2006，11（5）：51- 54.
[8] 尹秀玲，赵香汝，薛瑞辰，等.中药“病毒克”颗粒剂对人工感染鸡新城疫病防治的免疫功能的影响[J].黑龙江畜牧兽医，2004（12）：61-62.
[9] LUNDQVIST M L，MIDDLETON D L，HAZARD S，et al.The immunoglobulin heavy chain locus of the duck.Cenomic organization and expression of D，J and C region genes[J].J Biol Chem，2001，276（50）：46729-46736.
[10] 邓惠丹，杨军，邓俊良，等.复方中药“禽康散”对人工感染新城疫病毒肉鸡血清免疫球蛋白及新城疫抗体效价的影响[J].中国兽医学报，2014，34（1）：144-147.
[11] MA D Y，LIU Y Q，LIU S W，et al.Influence of Ligustrum lucidum and Schisandra chinensis fruits on antioxidative metabolism and immunological parameters of layer chicks[J].Asian-Aust J Anim Sci，2007，20：1438-1443.
[12] PESTKA J J.Deoxynivalenol：Toxicity，mechanisms and animal health risks[J].Animal feed science and technology，2007，137（3/4）：283-298.
[13] 宫佳杰，耿芳芳，许伟，等.DON暴露对雏鸡免疫功能的影响[J].中国兽医学报，2016，36（11）：1923-1928.
关键词 增效“病毒克”;新城疫病毒;免疫球蛋白;抗体效价;免疫器官指数
中图分类号 S852.65;S859 文献标识码 A
文章编号 0517-6611（2020）20-0083-04
doi：10.3969/j.issn.0517-6611.2020.20.023
Effects of Synergistic “Bingduke” Granules on Immunology Function of Broilers Artificially Infected by NDV
HAO Song-hua，WANG Xu-zhen （Shanxi College of Animal Science and Veterinary Medicine，Taiyuan，Shanxi 030024）
Abstract [Objective] To evaluate the effects of Synergistic “Bingduke” Granules on the immune function of broilers artificially infected by newcastle disease virus（NDV）.[Method] Two hundred and fifty healthy AA broilers （1 day-old） were selected and randomly divded into five groups.At 21-day-old，broilers in all groups were challenged by highly virulent strain of NDV except negative group （Ⅳ）.0.5%，1.0% and 2.0% Synergistic “Bingduke” Granules were added in the drinking water of 22-25 day-old broilers in I，Ⅱ，Ⅲ treatment groups，and no drug was administrated in Ⅳ group，Ⅴ group（positive control group）.The changes of serum immunoglobulin and ND antibody titer were observed at 1 d before virus challenge and 1，3，7 and 15 d after virus challenge.At the end of the test，10 chicken randomly selected from each group were slaughtered，and thymus，bursa and spleen were quickly excised，and the immune organ index was calculated.[Result] IgG content in the serum in Ⅱ and Ⅲ groups had extremely significant difference with that in Ⅰ，Ⅳ and Ⅴ groups at 15 d after virus challenge（P<0.01）.At 3，7 d after virus challenge，IgA content in Ⅱ and Ⅲ groups was extremely significantly higher than that of Ⅳ，Ⅴ group （P<0.01）， IgA content in Ⅲ group（adding 2.0% Synergistic “Bingduke” Granules ） were the highest.IgM content in the serum had no significant difference among all groups（P>0.05）.NDV antibody titer inⅠ，Ⅱ and Ⅲ groups was extremely significantly higher than that of Ⅴ group after virus challenge 7 and 15 d（P<0.01）.Compared with Ⅳ group，the spleen index，thymus index and bursa index in Ⅰ，Ⅱ and Ⅴ groups were significantly increased （P< 0.05）;The bursa index in Ⅲ group significantly increased （P<0.05），the spleen index and thymus index in Ⅲ group increased （P> 0.05）.[Conclusion] Adding 1.0%-2.0% Synergistic “Bingduke” Granules in the drinking water could significantly improve the immune function and the resistance of broilers to NDV. Key words Synergistic “Bingduke” Granules;Newcastle disease virus;Blood immune globulin;Antibody titer;Immune organ index
新城疫是由新城疫病毒（newcastle disease virus，NDV）引起鸡的急性高度传染性疾病，临床特征表现为呼吸困难、下痢、神经紊乱、浆膜和黏膜出血 [1]。目前对该病尚无特效的治疗方法，国内外均采用接种疫苗的方法进行预防，但仍有免疫鸡群发生非典型新城疫的报道 [2]。增效“病毒克”颗粒剂是在原“病毒克”组方的基础上增加口蘑，用水提醇沉后加辅料制成纯中药的抗病毒制剂 [3]。口蘑为河北省张家口坝上地区特产，富含口蘑多糖，具有免疫调节、抗应激和抗肿瘤等多种生物活性 [4]，在兽医临床中的研究和使用报道较少。笔者通过分析肉仔鸡血清新城疫抗体效价、免疫球蛋白水平和免疫器官指数的变化，研究不同剂量增效“病毒克”颗粒剂对肉仔鸡人工感染NDV免疫功能的影响，旨在为减抗替抗、健康养殖和禽产品提质增效提供科学依据。
1 材料与方法
1.1 药物与毒株
增效“病毒克”颗粒剂，由板蓝根、黄芩、金银花、黄花、黄连等多种中药组成;鸡免疫球蛋白（IgA、IgG、IgM）ELISA试剂盒，购自爱德士/IDEXX;新城疫病毒F48E9株，由中国兽医药品监察所生产，使用前在SPF鸡胚（购自北京梅里亚维通实验动物技术有限公司）中传代复壮，测得半数感染量（EID 50）为5×10 -4.71/mL;新城疫抗原和新城疫阳性血清，购自中国兽医药品监察所。
1.2 试验动物分组及处理
250只1日龄健康AA肉仔鸡（北京家禽育种有限公司提供），在严格消毒条件下常规饲养管理。21 d时，翅静脉采血检测ND-HI抗体，将母源抗体阴性鸡随机分为低剂量组（Ⅰ）、中剂量组（Ⅱ）、高剂量组（Ⅲ）、阴性对照组（Ⅳ）和阳性对照组（Ⅴ），每组50只。根据预试验结果，除Ⅳ组外，其余组鸡胸肌注射接种NDV稀释液0.2 mL（20倍EID 50），Ⅳ组注射等量的生理盐水并单房隔离饲养。Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组于22～25日龄分别按饮水中含增效“病毒克”颗粒剂0.5%、1.0%、2.0%的剂量给药，连用4 d，Ⅳ、Ⅴ组饮水中不加药，试验期共36 d。
1.3 饲料组成与饲养水平 饲料由山西正大饲料有限公司提供，饲料组成及营养水平见表1。
1.4 血清制备及免疫球蛋白测定
攻毒前1 d以及攻毒后1、 3、7、15 d，每组随机抽取10只鸡，分别翅静脉采血，待血液凝固后，3 000 r/min离心15 min，分离血清并保存于 -20 ℃ 冰箱中，备测。参照ELISA试剂盒说明书，使用酶标仪测定血清中各免疫球蛋白水平。
1.5 ND抗体效价测定
分别于20、22、25、32和36 d，每组随机抽取15只鸡，分别翅静脉采血，分离血清，采用红细胞凝集抑制（HI）试验对样品进行ND抗体测定，将完全抑制4个HAU抗原的血清最高稀釋倍数作为HI抗体效价，以log2X表示 [5]。
1.6 雏鸡免疫器官指数测定 36 d试验结束时，每组随机抽取15只鸡，称重后屠宰，分别摘取胸腺、脾脏和法氏囊，去除周围附着的组织和脂肪，并用滤纸吸去血渍，称其湿重，按以下公式计算各免疫器官指数：免疫器官指数=免疫器官质量/鸡体质量×100%。
1.7 数据处理 试验数据均以 x±SD表示，使用SPSS19.0统计软件中的ANOVA进行方差分析，采用邓肯氏法进行多重比较。
2 结果与分析
2.1 增效“病毒克”对人工感染NDV肉仔鸡血清中IgG、IgA和IgM含量的影响
Ⅰ～Ⅲ组在攻毒后1 d，血清IgG、IgA和IgM含量较Ⅳ组均有所升高。攻毒后1、3、7 d，Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组血清IgG含量均高于Ⅴ组，但差异均不显著（P> 0.05）;攻毒后15 d，Ⅱ、Ⅲ组极显著高于Ⅰ、Ⅳ和Ⅴ组（P<0.01）。攻毒后3 d，Ⅱ、Ⅲ组IgA含量极显著高于Ⅰ、Ⅳ、Ⅴ组（P<0.01）;攻毒后7 d，Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组IgA含量亦极显著高于Ⅳ、Ⅴ组（P<0.01）;攻毒后 15 d，各组IgA含量基本趋于一致。在整个试验期内，各增效“病毒克”治疗组（Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ）、阴性对照组（Ⅳ）及阳性对照组（Ⅴ）血清IgM含量差异均不显著（P>0.05），表明增效“病毒克”颗粒剂对NDV接种肉仔鸡血清中IgM含量的影响不明显（表2）。
2.2 增效“病毒克”颗粒剂对人工感染NDV肉仔鸡ND抗体效价的影响
攻毒后3 d，各治疗组才产生ND抗体，各治疗组（Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ）ND抗体效价均高于阳性对照组（Ⅴ），但差异不显著（P>0.05）;在攻毒后7 d，各治疗组（Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ）与Ⅳ、Ⅴ组差异极显著（P<0.01）。各治疗组在攻毒后3 d产生新城疫抗体，并逐渐增加，呈现明显的量效关系（表3）。
2.3 增效“病毒克”颗粒剂对人工感染NDV肉仔鸡免疫器官指数的影响
所有屠宰的试验肉仔鸡免疫器官肉眼观察未见异常。与Ⅳ组相比，Ⅰ、Ⅱ、Ⅴ组脾脏指数、胸腺指数和法氏囊指数显著升高（P<0.05）;Ⅲ组法氏囊指数显著高于Ⅳ组 （P<0.05），脾脏指数和胸腺指数也高于Ⅳ组，但差异不显著 （P>0.05）（表4）。
3 讨论
3.1 增效“病毒克”颗粒剂具有提高NDV感染鸡免疫球蛋白的作用
以金银花等清热解毒药为主药，以黄芪、甘草等扶正药为辅药，筛选出具有抗病毒功效的中药复方“病毒克”散剂，进一步研究开发为颗粒剂，临床应用效果良好。郑雪花等 [6]研究表明中药复方“病毒克”颗粒剂与 NDV 感作和不感作在鸡胚水平上均对 NDV有明显的抑制作用，即延长鸡胚存活时间和降低尿囊液病毒血凝价;杨玉成等 [7]研究证实中药复方“病毒克”颗粒剂与NDV 以3种不同的作用方式在细胞水平上均对NDV有明显的抑制作用;尹秀玲等 [8]研究表明中药复方“病毒克”颗粒剂能显著提高人工感染NDV鸡外周血IgG、IgA、IgM含量。 免疫球蛋白主要存在于血清中，具有抗病毒、抗菌、抗外毒素等多种生物活性功能。家禽体内含有IgG、IgA和IgM 3种重要的免疫球蛋白 [9]。IgG在血液中含量最高，是B淋巴细胞活化后产生，具有抗细菌、抗病毒和抗毒素及调理、凝集和沉淀抗原的作用，在抗体介导的防卫机理中占主要地位;IgM是由浆细胞完整分泌，常存在于血液内，是体液免疫反应仅次于IgG的抗体，是抗病原微生物感染的先锋抗体，在抗感染早期发挥着重要作用 [10];IgA是黏膜免疫的主要抗体，在保护呼吸道、肠道、泌尿生殖道、乳腺和眼睛等黏膜抵抗病原微生物和有害物质的入侵，作为抗感染的最初屏障起着十分重要的作用 [4]。因此，检测特异性IgG、IgA 、IgM抗体水平是评价机体免疫水平的重要指标。
该试验中各增效“病毒克”颗粒剂治疗组血清IgG含量均高于阳性对照组，在攻毒15 d时，2.0%和1.0%治疗组明显高于0.5%治疗组、阴性和阳性对照组（P<0.01），说明增效“病毒克”颗粒剂具有提高NDV感染肉鸡血清IgG含量的作用，对 NDV具有调理、凝集和沉淀的作用，从而增强机体的防卫机能。攻毒后3 d，2.0%和1.0%治疗组IgA含量极显著高于0.5%治疗组、阴性对照组、阳性对照组（P<0.01）;攻毒后 7 d，各治疗组IgA含量亦明显高于阳性对照组、阴性对照组，2.0%治疗组IgA含量明显高于1.0%治疗组;攻毒后15 d，各组IgA含量基本趋于一致。这说明增效“病毒克”颗粒剂具有提高 NDV感染肉鸡血清IgA含量的作用，对于保护呼吸道、肠道、泌尿生殖道、乳腺和眼睛抵抗新城疫病毒的入侵方面起关键作用。
3.2 增效“病毒克”能提高NDV感染鸡ND抗体效价
已有的研究表明，口蘑多糖及某些中草药复方通过刺激B细胞，使其分化增殖转变为浆细胞，分泌抗体从而增强动物机体体液免疫功能 [11]。血清中 HI抗体水平的高低在一定程度上可反映机体对疾病的抵抗能力。该试验通过给试验肉仔鸡人工接种NDV-F48E9株后，检测血清中抗NDV特异性HI抗体效价水平，研究增效“病毒克”颗粒剂对肉仔鸡体液免疫功能的影响。结果表明，各治疗组在攻毒后3 d才产生新城疫抗体，各治疗组ND抗体效价在攻毒3 d后均高于阳性对照组（P>0.05），且在攻毒后7 d各治疗组（Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ）与Ⅳ、Ⅴ组差异极显著（P<0.01），说明增效“病毒克”能促进NDV感染肉仔鸡的体液免疫功能，且呈现一定的量效关系。
3.3 增效“病毒克”对肉仔鸡免疫器官指数的影响
胸腺、脾脏和法氏囊，是鸡体内参与细胞免疫和体液免疫的重要器官，其发育状态能在一定程度上反映出机体免疫系统的状态，因此常用免疫器官指数作为衡量机体免疫功能的直观指标 [12]。在正常动物机体内，免疫器官重量增加为免疫功能增强的表现，而免疫器官重量降低提示免疫功能降低或抑制，如长期摄入过量的DON可以降低雏鸡的免疫器官指数和免疫功能 [13]。该试验结果表明，阳性对照组、低、中剂量组脾脏指数、胸腺指数和法氏囊指数显著高于阴性对照组 （P<0.05）;值得注意的是，阳性对照组脾脏指数、胸腺指数和法氏囊指数显著高于阴性对照组（P<0.05），可能与病毒感染造成免疫器官一定程度的出血、水肿及增生等组织病变有关;低、中、高剂量的增效“病毒克”颗粒剂一方面可以刺激免疫器官中T、B淋巴细胞增生，另一方面也对受损免疫器官具有修復的功效。关于增效“病毒克”颗粒剂对NDV感染肉仔鸡免疫器官组织学变化的详细机理有待日后进一步深入 研究。
4 结论
饮水中添加不同剂量增效“病毒克”颗粒剂具有提高NDV感染肉仔鸡ND抗体效价和外周血液中IgG和IgA含量的作用，从而增强机体对新城疫病毒的体液免疫功能，拮抗和修复NDV对鸡体各组织器官造成的损伤和破坏。
参考文献
[1]
蔡宝祥.家畜传染病学[M].4版.北京：中国农业出版社，2001.
[2] 黄道成.免疫鸡群发生非典型新城疫[J].养禽与禽病防治，2016（2）：33-34.
[3] 杨玉成.中药病毒克颗粒剂的研制及其抗NDV的药理学研究[D].北京：中国农业大学，2006.
[4] 王玉俊，刘开阳，孙黎，等.口蘑多糖对小白鼠免疫功能的影响[J].张家口医学院学报，1996，13（2）：17-18.
[5] 阴天榜，刘兴友.家禽免疫学[M].北京：中国农业科技出版社，1999： 260-269.
[6] 郑雪花，田勇，杨玉成，等.增效“病毒克”颗粒剂对NDV在鸡胚中增殖的影响[J].黑龙江畜牧兽医，2008（9）：94-95.
[7] 杨玉成，田勇，乔健，等.“病毒克”颗粒剂对NDV在鸡胚成纤维细胞中增殖的影响[J].中国农业大学学报，2006，11（5）：51- 54.
[8] 尹秀玲，赵香汝，薛瑞辰，等.中药“病毒克”颗粒剂对人工感染鸡新城疫病防治的免疫功能的影响[J].黑龙江畜牧兽医，2004（12）：61-62.
[9] LUNDQVIST M L，MIDDLETON D L，HAZARD S，et al.The immunoglobulin heavy chain locus of the duck.Cenomic organization and expression of D，J and C region genes[J].J Biol Chem，2001，276（50）：46729-46736.
[10] 邓惠丹，杨军，邓俊良，等.复方中药“禽康散”对人工感染新城疫病毒肉鸡血清免疫球蛋白及新城疫抗体效价的影响[J].中国兽医学报，2014，34（1）：144-147.
[11] MA D Y，LIU Y Q，LIU S W，et al.Influence of Ligustrum lucidum and Schisandra chinensis fruits on antioxidative metabolism and immunological parameters of layer chicks[J].Asian-Aust J Anim Sci，2007，20：1438-1443.
[12] PESTKA J J.Deoxynivalenol：Toxicity，mechanisms and animal health risks[J].Animal feed science and technology，2007，137（3/4）：283-298.
[13] 宫佳杰，耿芳芳，许伟，等.DON暴露对雏鸡免疫功能的影响[J].中国兽医学报，2016，36（11）：1923-1928.