【摘 要】
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为建立鸭疫里氏杆菌(RA)的血清学快速检测方法,本研究根据GenBank中登录的camp基因序列设计引物,以吉林RA分离株JL-1的基因组DNA为模板,通过PCR扩增camp基因,并构建pET-camp
【机 构】
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吉林农业大学动物科技学院,长春市动物疫病预防控制中心,中国兽医药品监察所
【基金项目】
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吉林省科技发展计划项目(20110230);吉林省教育厅“十二五”科学技术研究项目(201348)
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为建立鸭疫里氏杆菌(RA)的血清学快速检测方法,本研究根据GenBank中登录的camp基因序列设计引物,以吉林RA分离株JL-1的基因组DNA为模板,通过PCR扩增camp基因,并构建pET-camp重组表达质粒,转化至E.coli BL21(DE3)中诱导表达出分子量约为37 ku重组蛋白,western blot分析结果表明该蛋白能够与血清1、2、10、11和17型RA全菌体阳性血清发生特异性反应。以纯化的重组蛋白为包被抗原建立间接ELISA方法,结果显示其具有良好的特异性和重复性,与RA超声裂解抗原ELISA方法的符合率达到77.5%。研究结果进一步验证了Camp蛋白具有良好免疫原性,并且为RA多种血清型共同抗原,在RA的检测及亚单位疫苗开发中具有良好的应用价值。
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