【摘 要】
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目的:探索与人精子膜存在交叉反应的溶脲脲原体蛋白UreG抗体对小鼠体外受精的影响.方法:提取溶脲脲原体总DNA,用自行设计的引物扩增UreG全序列,PCR产物经TA克隆后,用BamH Ⅰ
【机 构】
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上海交通大学医学院组织胚胎学教研室
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目的:探索与人精子膜存在交叉反应的溶脲脲原体蛋白UreG抗体对小鼠体外受精的影响.方法:提取溶脲脲原体总DNA,用自行设计的引物扩增UreG全序列,PCR产物经TA克隆后,用BamH Ⅰ和Hind Ⅲ双酶切,克隆到表达载体pET-28a(+)中.在E.coliBL 21中,异丙基-β-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导下表达His融合蛋白.用亲和层析纯化的重组蛋白免疫BALB/c小鼠,获取多克隆抗体.观察该抗体对小鼠体外受精的影响.结果:对表达重组蛋白的质粒进行DNA测序以及十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分析,证实获取了目的蛋白.ELISA检测证实,免疫小鼠产生了高效价的抗体.该抗体能够抑制小鼠精卵的融合.结论:与人精子膜存在交叉反应的溶脲脲原体蛋白UreG抗体,可导致小鼠精卵结合率降低.
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