【摘 要】
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目的探讨多重实时荧光PCR检测方法对川贝母及伪品鉴别的可行性。方法通过对常见贝母属植物的ITS、psb Atrn H、rbc L和matK基因序列种间变异、遗传距离及系统发育关系分析,选
【机 构】
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山东农业科学院生物技术研究中心中药分子鉴定公共服务平台; 山东省食品药品检验研究院; 山东百味堂中药饮片有限公司; 山东中医药大学药学院天然药物研究所;
【基金项目】
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山东省创新公共服务平台:中药分子鉴定公共服务平台(2018JGX111);山东省农业科学院农业科技创新工程:山东道地药材产业关键技术创新与应用(CXGC2018D3);山东省高等学校对接产业类协同创新中心:中药质量控制与全产业链建设协同创新中心;山东省重点研发计划:30种柴胡SNP指纹图谱芯片的开发及利用(2018GSF11902)
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目的探讨多重实时荧光PCR检测方法对川贝母及伪品鉴别的可行性。方法通过对常见贝母属植物的ITS、psb Atrn H、rbc L和matK基因序列种间变异、遗传距离及系统发育关系分析,选择进化速率快、种间变异大、种内变异小的基因作为靶基因,设计川贝母及伪品贝母的特异性引物和Taqman探针,建立一种多重实时荧光PCR检测方法。通过特异性、灵敏度及混合样本检测与测序方法比较进行方法评估。结果贝母属ITS和psb A-trn H变异位点高于rbc L和mat K,通过遗传距离分析rbc L和mat K基因显著低于ITS和psb A-trn H基因,以ITS作为靶基因,建立多重实时荧光PCR检测方法特异性强,灵敏度达0.01ng,对18份样本抽查检出4份伪品贝母,检测结果与构建的NJ树聚类分析结果完全一致。结论基于ITS区域序列为靶基因建立多重实时荧光PCR检测方法能够成功鉴定川贝母及其混伪品,为川贝母真伪鉴别提供依据。
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