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【目的】建立饲料中3种雌激素（17β-雌二醇、苯甲酸雌二醇和戊酸雌二醇）的固相萃取-高效液相色谱（SPE-HPLC）测定方法。【方法】饲料样品经甲醇＋水提取，固相萃取柱净化，采用Dionex C18色谱柱，以乙腈和水为流动相进行梯度洗脱，流速1.0 mL/min，检测波长230 nm，柱温30℃。【结果】3种雌激素的线性关系较好；检出限为0.5～1.0 mg/kg；平均回收率为89.3％～108.0％。【结论】SPE-HPLC法操作简便、线性范围宽、检出限低、准确度高，可同时测定饲料中3种雌激素的含量。