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综合多种细菌、真菌DNA模板的提取方法，采用β-巯基乙醇裂解细胞壁，利用蜗牛酶和溶菌酶消化细胞壁，再利用石英砂机械破壁，能彻底破坏细菌、真菌细胞壁，提取高质量的DNA，摸索出一套从奶样中同时提取细菌、真菌核酸的新方法。建立双重PCR方法，同时完成对细菌16SrRNA保守区特异性基因片段和真菌18SrRNA保守区特异性基因片段的扩增，快速诊断奶牛乳房炎是细菌感染还是真菌感染或是混合感染。对采自临床型乳腺炎和隐性乳腺炎病例的共计84个乳样分别用传统细菌学培养法和双重PCR方法对比鉴定。结果表明，双重PCR检测