【摘 要】
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在对中国鸡痘病毒疫苗株282E4基因组DNA进行克隆与亚克隆的基础上,进一步插入Pll一LacZ标记基因,根据蓝斑选择原理筛选出3个为病毒在细胞培养物上生长所不必需的片段。为了便于外源基因的插入,特将P7.5一Pll一LacZ基因框转移至BLUESCRIPTSKM13一的BdmHI位点,在P7.5下导人多克隆位点(MCS),建立了载体插入标记pSGM1175。以SstII和ApaI将MCS一P7.
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在对中国鸡痘病毒疫苗株282E4基因组DNA进行克隆与亚克隆的基础上,进一步插入Pll一LacZ标记基因,根据蓝斑选择原理筛选出3个为病毒在细胞培养物上生长所不必需的片段。为了便于外源基因的插入,特将P7.5一Pll一LacZ基因框转移至BLUESCRIPTSKM13一的BdmHI位点,在P7.5下导人多克隆位点(MCS),建立了载体插入标记pSGM1175。以SstII和ApaI将MCS一P7.5一Pll一LacZ框切下,置入一个亚充隆的非必需片段中,构建成中国鸡痘病毒插入载体pFG1175一1。以PstI和SmaI酶切pVLgB分离MDVgB基因的开放阅读框,并将其插入pFG1175中P7.5的下游,得到携带gB基因的质粒pFGB1175一1。将此质粒以脂质体转染282E4株感染3一4小时的鸡胚成纤维细胞,同样采用蓝斑筛选技术得到重组的蓝斑病毒。以MDVgB单克隆抗体进行间接免疫荧光,证实了感染细胞中gB抗原的存在,从而成功地建立了可表达MDVgB糖蛋白的以中国疫苗株为基础的重组鸡痘病毒。
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