【摘 要】
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目的 制备抗脱氧雪腐镰刀茵烯醇(DoN)单克隆抗体(McAb)并对其进行初步鉴定.方法 采用小剂量长周期的免疫方案,以DON-牛血清白蛋白(BSA)偶联物免疫雌性BALB/c小鼠,采用细胞融
【机 构】
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山东大学公共卫生学院微生物检验所,济南,250012;济南铁路疾病预防控制中心,济南,250012;中国疾病预防控制中心营养与食品安全所,北京,100052
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目的 制备抗脱氧雪腐镰刀茵烯醇(DoN)单克隆抗体(McAb)并对其进行初步鉴定.方法 采用小剂量长周期的免疫方案,以DON-牛血清白蛋白(BSA)偶联物免疫雌性BALB/c小鼠,采用细胞融合的方法制备杂交瘤细胞株,酶联免疫吸附试验(ELISA)检测上清中McAb,对抗体分泌阳性的细胞株进行克隆化,直至抗体阳性率100%,用竞争抑制ELISA法进一步检测McAb的特异性,腹水诱生法制备大量McAb,并用饱和硫酸铵对其进行纯化,用抗体亚类鉴定试剂盒对该McAb亚类进行鉴定,BCA蛋白测定试剂盒测定蛋白含量,ELISA检测McAb的滴度、参考工作稀释度和亲和常数.结果 DON-BSA免疫的BALB/c小鼠血清效价为1∶256000,与BSA有强烈的交叉反应.细胞融合后,ELISA筛选抗体分泌阳性的杂交瘤细胞株,经3轮克隆化,建立了1株能稳定分泌抗DON-BSA McAb的杂交瘤细胞株3G5,腹水诱生法制备了大量的McAb.该McAb属IgG1,IgG含量为6.06 g/L,抗体滴度为1∶500000,参考工作稀释度为1∶64 000,抗体亲和常数为1.62×109.用间接竞争抑制ELISA测得校正曲线线性范围9.8～10 000 ng/mL,线性方程Y=-0.272 6X+0.225 9(r=0.930 9).结论 获得了分泌抗DON-McAb的杂交瘤细胞株,该单克隆抗体灵敏度高,特异性强,可用于制备高质量国产DON-ELISA检测试剂盒.
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