观察银杏内酯B(GB)对缺血缺氧性脑损伤(HIBD)新生大鼠脑皮质神经元凋亡及P-AKT(ser473)蛋白表达的影响。
方法采用随机数字表法将90只SPF级新生7日龄SD大鼠分为假手术组、缺血缺氧(HI)组及GB组，每组30只。采用经典Rice法建立HIBD动物模型，其中GB组分别于术后0 h、24 h按每千克体重10 mg经腹腔注射GB。各组均于术后不同时间点(包括术后6 h、12 h、24 h及48 h)随机处死6只大鼠，采用荧光定量PCR技术检测凋亡关键执行分子Caspase-3 mRNA表达水平，发现GB抑制凋亡最显著的时间点为缺血缺氧后24 h；然后增加大鼠并纳入GB＋LY294002组，于制模后给予GB及PI3K-AKT通路抑制剂LY294002预干预，进一步探讨缺血缺氧后24 h时PI3K-AKT通路在GB抗凋亡中的作用。采用HE染色法观察各组大鼠脑皮质结构变化，采用TUNEL法检测脑皮质神经元凋亡情况，采用免疫组化法检测P-AKT(ser473)蛋白表达情况。
结果HI组和GB组Caspase-3 mRNA表达于缺血缺氧后6 h开始增高，于缺血缺氧后12 h进一步上升，于缺血缺氧后24 h时达到峰值，随后开始下降；与假手术组比较，HI组和GB组Caspase-3 mRNA表达于缺血缺氧后6 h、12 h、24 h、48 h均明显增高，另外GB组Caspase-3 mRNA表达均明显低于HI组，组间差异具有统计学意义(P<0.05)。与假手术组比较，缺血缺氧后24 h时HI组、GB组及GB＋LY294002组脑皮质神经元Caspase-3表达增强、凋亡阳性细胞增多、P-AKT(ser473)表达减弱，其中HI组和GB＋LY294002组Caspase-3表达及凋亡细胞数量均明显超过GB组，P-AKT(ser473)蛋白表达则明显弱于GB组，组间差异均具有统计学意义(P<0.01)。
结论银杏内酯B具有明显抗神经元凋亡作用，且以缺血缺氧后24 h时对神经细胞凋亡的抑制作用最强；此外PI3K-AKT信号通路在GB抗缺血缺氧诱导脑神经元凋亡中发挥重要作用。