【摘 要】
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目的 构建海南产桶形芋螺毒管cDNA文库,为桶形芋螺毒素基因资源的永续保存和新型药物的研发提供依据.方法 以总RNA抽提试剂盒,从桶形芋螺毒管中提取总RNA,采用SMART技术,LD-P
【机 构】
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热带生物资源教育部重点实验室,海南大学生物技术实验中心,海南大学海洋学院,海南,海口,570228
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目的 构建海南产桶形芋螺毒管cDNA文库,为桶形芋螺毒素基因资源的永续保存和新型药物的研发提供依据.方法 以总RNA抽提试剂盒,从桶形芋螺毒管中提取总RNA,采用SMART技术,LD-PCR扩增获得双链cDNA,经Sfi Ⅰ酶切和CHROMA SPIN-400柱分级分离后,将500bp以上的片段与载体pDNR-LIB连接,通过电穿孔转入E.coli JM109,获得原始文库;随机挑取单菌落,经菌液PCR鉴定重组率及插入片段大小,最后扩增文库.结果 经鉴定,所得文库的容量约为5.0X106个克隆,原始文库的平均滴度为5.01×108,插入片段平均长度为1.0kb,文库的重组率达到92%.结论 所构建的文库是合格的,为新型芋螺毒素的发现和研究利用提供了依据.
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