【摘 要】
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目的 应用聚合酶链反应 (PCR) 寡核苷酸探针快速检测结核菌耐药基因突变,建立一种新的分子药敏试验方法。方法 以传统药敏试验、PCR 单链构象多态性和PCR 直接测序方法为对
【基金项目】
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军队医学杰出中青年人才科研基金项目(01J020)
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目的 应用聚合酶链反应 (PCR) 寡核苷酸探针快速检测结核菌耐药基因突变,建立一种新的分子药敏试验方法。方法 以传统药敏试验、PCR 单链构象多态性和PCR 直接测序方法为对照,对利福平、链霉素(SM)和乙胺丁醇耐药的结核菌基因rpoB、rpsL、rrs和embB的寡核苷酸探针,通过反向斑点杂交检测 78株结核菌临床分离株PCR产物。结果 18株结核菌药物敏感株的 4种耐药基因均为野生型。60株结核菌耐药分离株中, 59株为耐RFP株,rpoB基因突变率为 93. 2%,最常见的突变位点为 531位和 526位密码子, 33株为耐SM株,rpsL基因突变率为 75. 8%,均为 43位密码子AAG→AGG突变,rrs基因突变率为 9 .1%,均为 513位A→C突变,rpsL和rrs基因总突变率为 84 .8%; 43株为耐EMB株,embB基因突变率为 58 .1%,均为 306位密码子突变。结论 应用PCR 寡核苷酸探针反向斑点杂交技术可简便、快速、准确地分析大多数结核菌耐药基因突变,检测其耐药性。
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