香菇多糖具有增强免疫、抗肿瘤、降血压、降血脂等功效,广泛应用于食品与医药领域。以新鲜香菇为原料,采用木瓜蛋白酶和纤维素酶双酶协同加压热水法提取香菇多糖,优化双酶预水解的工艺条件。在此基础上,以凝胶层析法纯化香菇多糖,并鉴定纯化的香菇多糖。研究结果表明:纤维素酶加入量为1.00 g/g(以1 g绝干香菇质量计)和木瓜蛋白酶加入量为0.024 g/g(以1 g绝干香菇质量计),在p H 4.5和45℃的条件下,双酶协同预水解香菇原料10 h,接着采用加压热水法提取香菇多糖,在固液比1∶50(g/m L)和提取温度115℃条件下,提取80 min,香菇多糖得率可达23.6%。采用凝胶层析法纯化香菇多糖,以Superose 6 PG为分离介质,流动相为脱气纯水,在流速0.6 m L/min和柱温48℃的条件下,分离纯化香菇多糖粗品,经过两步分离纯化后,获得均一的多糖样品。以蒽酮-硫酸法、高碘酸钠法和红外光谱法鉴别纯化组分为香菇多糖;以凝胶渗透色谱法测定香菇多糖的重均分子量为3.75×104;以刚果红法分析香菇多糖,香菇多糖与刚果红形成络合物,最大吸收波长移向长波长,发生红移现象,表明纯化的香菇多糖中存在螺旋构象。研究结果为香菇多糖的高效提取与分离纯化提供了新的路线。