【摘 要】
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目的:观察Smad3在转化生长因子β1(TGF-β1)调控人牙本质基质蛋白1(DMP1)转录表达中的作用并对DMP1基因启动子上的结合位点进行初步定位.方法:将Smad3瞬时转染至具有矿化活性
【机 构】
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空军总医院口腔科,北京,100142;解放军总医院口腔医学研究所,北京,100853;南方医科大学南方医院口腔科,广东,广州,510515
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目的:观察Smad3在转化生长因子β1(TGF-β1)调控人牙本质基质蛋白1(DMP1)转录表达中的作用并对DMP1基因启动子上的结合位点进行初步定位.方法:将Smad3瞬时转染至具有矿化活性的人牙髓干细胞(HDPSC)中,观察Smad3蛋白表达和转位情况,并检测在有无TGF-β1的刺激下细胞中pGL3-P-193~+86和pGL3-P-505~+86启动子活性的变化.pGL3-P-505~+86与Smad3共转染至细胞中,10 ng/ml TGF-β1刺激2 h后,提取细胞核蛋白,EMSA法检测DMP1基因启动子-505~-193 bp区存在的Smad3结合位点.结果:HDPSC中瞬时转染Smad3后,其主要表达于细胞胞浆中,随着TGF-β1刺激不同时间后,Smad3在细胞中的表达出现从胞浆到胞核的转位.Smad3可明显加强TGF-β1下调pGL3-P-193~+86和pGL3-P-505~+86启动子活性的作用,在DMP1基因启动子-505~-193 bp区至少有一个Smad3结合区域为-209~-201 bp区的GTCTAGTCA序列.结论:Smad3是TGF-β1信号通路的下游作用分子,可介导TGF-β1下调DMP1基因转录过程,DMP1基因启动子-209~-201 bp区序列为Smad3结合区域.
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