【摘 要】
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目的 构建针对人乙酰肝素酶(HPSE)基因的小干扰RNA(siRNA)及其表达载体,观察其对A375细胞HPSE基因的干扰作用及其对肿瘤细胞体外侵袭的抑制作用.方法 设计并构建了重组质粒pR
【机 构】
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浙江大学医学院附属第一医院皮肤科,浙江大学医学院附属第一医院传染病研究所
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目的 构建针对人乙酰肝素酶(HPSE)基因的小干扰RNA(siRNA)及其表达载体,观察其对A375细胞HPSE基因的干扰作用及其对肿瘤细胞体外侵袭的抑制作用.方法 设计并构建了重组质粒pRNATU6.1/HPSE-siRNA,转染A375细胞,用实时荧光定量PCR法和蛋白质印迹法分别测定HPSE基因RNA和蛋白水平的表达变化,Matrigel侵袭实验观察A375细胞体外侵袭能力的改变.结果 将针对HPSE基因的siRNA的双链寡核苷酸片段正确克隆到pRNATU6.1载体;转染A375细胞,与对照组比较,HPSE-siRNA组HPSE基因和蛋白的表达均明显降低.转染后肿瘤细胞的体外侵袭能力与对照组相比受到明显抑制.结论 成功构建了针对HPSE基因的siRNA载体,HPSE-siRNA转染A375细胞可以显著降低细胞HPSE基因和蛋白的表达.
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