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目的:低密度脂蛋白进入血管内皮细胞后可刺激细胞产生活性氧,在内皮细胞的生长与损伤过程中起关键作用。实验拟进一步观察高浓度低密度脂蛋白对人脐静脉内皮细胞活性氧、NADPH氧化酶4 mRNA水平和凋亡的影响。方法:实验于2004-12/2006-02在卫生部老年医学重点实验室完成。①实验材料:脐带来自卫生部北京医院产科,产妇或家属签署知情同意书;低密度脂蛋白由卫生部北京医院老年医学研究所生化室经过超速离心提取。②实验过程及分组:分离人脐静脉内皮细胞。先以不同浓度的低密度脂蛋白处理人脐静脉内皮细胞24h以选取最佳的浓度,观察NADPH氧化酶4表达,分为:不加低密度脂蛋白的对照组;0.8g/L低密度脂蛋白组;1.6g/L低密度脂蛋白组;2.4g/L低密度脂蛋白组。再以1.6g/L低密度脂蛋白浓度处理人脐静脉内皮细胞不同的时间以选取最佳的处理时间观察NADPH氧化酶4表达,分为:不加低密度脂蛋白的对照组,12h处理组,24h处理组,48h处理组。以最佳浓度和最佳时间处理人脐静脉内皮细胞,并观察其NADPH氧化酶4表达、活性氧生成和凋亡。③实验评估:反转录-聚合酶链反应检测人脐静脉内皮细胞中NADPH氧化酶的表达;流式细胞仪检测胞内活性氧生成量和细胞凋亡率,Hoechst33342染色分析细胞凋亡。结果:①1.6g/L低密度脂蛋白处理24h后人脐静脉内皮细胞内活性氧生成量高于对照组(P<0.05)。②1.6g/L低密度脂蛋白处理24h组细胞凋亡也比对照组明显增加(P<.05)。③用反转录-聚合酶链反应检测不同浓度(0.8,1.6,2.4g/L)低密度脂蛋白处理人脐静脉内皮细胞24h和以1.6g/L低密度脂蛋白处理人脐静脉内皮细胞不同时间(12,24和48h)时NADPH氧化酶4 mRNA水平变化,结果显示与不加低密度脂蛋白的对照组相比,各组NADPH氧化酶4 mRNA表达均增强。结论:低密度脂蛋白上调人脐静脉内皮细胞内NADPH氧化酶4 mRNA表达,并促进细胞内活性氧生成和细胞凋亡。