【摘 要】
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[目的]建立适合蚊虫总RNA提取的方法,探讨4种不同保存样本方法对蚊虫总RNA提取的影响.[方法]以室温、4℃冰箱、-20 cC冰箱、-80℃冰箱4种不同方法保存蚊虫为研究对象,运用改
【机 构】
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皖南医学院检验学院,芜湖,241002
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[目的]建立适合蚊虫总RNA提取的方法,探讨4种不同保存样本方法对蚊虫总RNA提取的影响.[方法]以室温、4℃冰箱、-20 cC冰箱、-80℃冰箱4种不同方法保存蚊虫为研究对象,运用改良SDS法、传统SDS法和TRIzol法分别提取蚊虫总RNA,用紫外分光光度计、琼脂糖凝胶电泳和RT-PCR检测提取RNA的质量,并比较提取效果.[结果]改良SDS法、传统SDS法和TRIzol法提取蚊虫总RNA的浓度值分别为1.223 3土0.374 3、0.675 0±0.319 8、0.3100±0.123 6,3种方法的浓度值差异具有统计学意义(F=14.767,P＜0.001).经LSD检验,改良SDS法提取蚊虫总RNA的浓度高于传统SDS法、TRIzol法(P=0.005、P＜0.001);改良SDS法提取的蚊虫总RNA纯度较高,A260/A280、A260/A236分别在1.8-2.0及2.0-2.2之间;电泳检测结果表明28 s、18s及5.8s条带清晰完整,条带之间无弥散,且无苯酚、蛋白质和gDNA污染;β-actin扩增显示符合RT-PCR的实验要求.在一个月内,-20℃、-80℃冰箱保存的蚊虫样本,其总RNA的提取未见明显降解.[结论]改良SDS法是一种经济便利、可提取高质量蚊虫RNA的方法.-20℃、-80℃冰箱在一个月内对蚊虫样本具有较好的保存效果.
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