【摘 要】
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目的:研究当归-川芎含药血清(Angelicae Sinensis Radix-Chuanxiong Rhizoma medicated serum,ASRCRS)对过氧化氢(H2O2)诱导高分化大鼠肾上腺嗜铬瘤细胞(PC12细胞)氧化损伤的保护作用及其分子机制.方法:采用H2O2体外诱导PC12细胞氧化损伤,并以终体积分数为15％的ASRCRS低、中、高剂量组进行干预.采用噻唑蓝(MTT)比色法检测细胞存活率;荧光倒置显微镜观察细胞形态;试剂盒检测细胞上清液乳酸脱氢酶(LDH),丙二醛(MDA)含量和细
【机 构】
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广州中医药大学中药学院,广州 510006;广州中医药大学第二临床医学院,广州 510006;广东省中医院大学城医院,广州510006
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目的:研究当归-川芎含药血清(Angelicae Sinensis Radix-Chuanxiong Rhizoma medicated serum,ASRCRS)对过氧化氢(H2O2)诱导高分化大鼠肾上腺嗜铬瘤细胞(PC12细胞)氧化损伤的保护作用及其分子机制.方法:采用H2O2体外诱导PC12细胞氧化损伤,并以终体积分数为15％的ASRCRS低、中、高剂量组进行干预.采用噻唑蓝(MTT)比色法检测细胞存活率;荧光倒置显微镜观察细胞形态;试剂盒检测细胞上清液乳酸脱氢酶(LDH),丙二醛(MDA)含量和细胞内超氧化物歧化酶(SOD)活力及活性氧(ROS)分布水平;Annexin V-FITC/PI双染法检测细胞凋亡情况;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测核转录因子E2相关因子2(Nrf2),Kelch样环氧氯丙烷相关蛋白-1(Keap1),血红素加氧酶-1(HO-1),SOD1蛋白的表达水平.结果:选择300 μmol·L-1 H2O2刺激24 h作为氧化损伤造模的条件.与正常组比较,H2O2模型组细胞形态异常,细胞存活率显著降低(P＜0.01);LDH,MDA含量升高(P＜0.01),SOD活力降低,ROS在细胞内分布增加;Nrf2,HO-1,SOD1蛋白表达水平均明显下调(P＜0.05,P＜0.01),Keap1蛋白表达水平明显上调(P＜0.01).与模型组比较,ASRCRS不同剂量组均能改善细胞形态,提高细胞存活率,抑制细胞凋亡;显著提高SOD酶活力(P＜0.01),抑制LDH的释放(P＜0.01)和ROS的生成,降低MDA含量(P＜0.01);明显上调Nrf2,HO-1,SOD1蛋白表达水平(P＜0.05,P＜0.01),显著下调Keap1蛋白表达水平(P＜0.01).结论:当归-川芎含药血清可能是通过上调Nrf2的蛋白表达,激活Nrf2/抗氧化反应元件(ARE)信号通路,增强细胞抗氧化损伤能力,抑制细胞凋亡,从而发挥保护H2O2损伤的PC12细胞的作用.
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