【摘 要】
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目的 探索经载体介导的RNA干扰法建立人NADH-细胞色素b5还原酶(EC1.6.2.2,NADH-cytochrome b5 reductase,b5R)缺陷细胞系的可行性.方法 设计并构建b5R的两种小干扰RNA(small inter-ference RNA,siRNA)表达载体,脂质体转染法瞬时转染BEL-7402细胞,半定量逆转录-PCR分析重组载体的干扰效应;G418筛选两种表达载体稳
【机 构】
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350025福州,第二军医大学福州总院临床学院实验科，解放军第180医院中心实验室,350025福州,第二军医大学福州总院临床学院实验科,350025福州,第二军医大学福州总院临床学院实验科
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目的 探索经载体介导的RNA干扰法建立人NADH-细胞色素b5还原酶(EC1.6.2.2,NADH-cytochrome b5 reductase,b5R)缺陷细胞系的可行性.方法 设计并构建b5R的两种小干扰RNA(small inter-ference RNA,siRNA)表达载体,脂质体转染法瞬时转染BEL-7402细胞,半定量逆转录-PCR分析重组载体的干扰效应;G418筛选两种表达载体稳定转染的BEL-7402细胞,并通过稳定转染的细胞克隆在b5R mRNA水平,酶活性,酶含量等方面干扰效果的鉴定,获得b5R缺陷的细胞克隆;噻唑蓝法测定b5R缺陷细胞的生长曲线.结果 获得两个靶向b5R基因的siRNA重组表达载体pSib5R-1和pSib5R-2,其中pSib5R-2瞬时转染对BEL-7402细胞b5R mRNA的抑制率达68.3%.获得18个稳定转染的细胞克隆,pSib5R-2转染的克隆中有两个克隆MR mRNA抑制率达48.2%和56.2%,酶活性抑制率为54.6%和63.5%,酶含量也有明显降低.b5R酶缺陷没有改变细胞的生长速度.结论 b5R基因的表达可被载体介导的RNA干扰有效抑制,成功建立了b5R缺陷的细胞表型,为进一步研究b5R基因的功能以及探讨Ⅱ型隐性先天性高缺血红蛋白症的发生机制提供了实验依据和材料。
其他文献
患者男,41岁,结婚6年,一直未育.准备作试管婴儿,故要求夫妇双方做染色体检查,表型、智力正常.无有毒物质及放射线接触史,身体健康.幼时曾患过腮腺炎.精液常规:少精、死精.睾丸活检:生精细胞偶见.睾丸小.父母非近亲婚配。
目的 检测胚胎移植时子宫内膜中白血病抑制因子(leukemia inhibitory factor,Lif)基因的表达水平,探讨超排卵对小鼠胚胎着床潜能的影响.方法 建立超排周期胚胎和自然周期胚胎受体妊娠小鼠模型,比较妊娠率、胚胎着床率与Lif基因表达水平之间的关系.结果 超排周期受体组的妊娠率(20.00%)和胚胎着床率(8.33%)显著低于自然周期组的妊娠率(55.00%)和胚胎着床率(35.
目的 探讨核型为45,X/46,XY的Turner综合征患者的发病机理.方法 应用细胞遗传学G显带、C显带技术确定核型,进一步用荧光原位杂交技术证实;再应用PCR技术对2例患者进行性别决定基因(sex-determining region of the Y,SRY)扩增,并将扩增产物在ABI-377测序仪上测序.结果 病例1的染色体核型为45,X/46,X,del(Y);病例2的染色体核型为45,
随着细胞遗传研究的进展,精神疾病的细胞遗传研究更加深入,有关情感性精神障碍患者的细胞遗传学研究国内外报道较少,我们对73例情感性精神障碍住院患者的和31名正常人的染色体核型做了分析。
例1 女,24岁.结婚5年,共孕5胎,第1胎人工流产,第2～5胎均于孕8周自然流产.查体:患者外观、智力正常.细胞遗传学检查,患者的核型为:46,XX,t(4;8)(4qter→4p14::8q13→8qter; 8pter→8q13∷4p14→4pter)(图1),其丈夫未做染色体检查。
Turner综合征在活产女婴新生几中发病率为0.3%～0.4%,在自然流产胚胎中,发生率可高达7.5%,是女性染色体畸变疾病中常见疾病之一.我们对90例不同程度Turner综合征患者,进行了临床病理体征及染色体核型分析检查,现报告如下。
例1 19岁,社会性别女.以无月经来潮"就诊.患者身高164 cm.发育正常,营养中等,腋毛、体毛有生长,颈部可见喉结.双侧乳房未发育.妇科检查:外生殖器模糊,可见阴毛,双侧大阴唇,小阴唇融合,右侧大阴唇内可触及似睾丸状包块,容积约6mL.质中等。
家系1 先证者,男,27岁,结婚3年.其妻分别于妊娠80d、50 d、40 d、40 d自然流产4次.夫妻表型、智力正常,身体健康,非近亲婚配,无不良嗜好.其妻妇科检查正常,孕期无有害物质接触史及感染史.夫妻双方性激素检查正常。
患者女,17岁,因乳房未发育,未见月经来潮到我院妇科就诊.患者系第1胎,足月正常产,出生时父29岁,母26岁,母亲孕期无患病及服药史,无先兆流产史,父母非近亲婚配,否认家族遗传病史。
先证者女,1岁半.因发育迟缓就诊.系第3胎第1产,足月顺产.出生时体重2800 g,身长50cm,会哭.患儿出生时父亲30岁,母亲28岁,父、母表型均正常,非近亲婚配。