【摘 要】
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目的 克隆烟曲霉pbs2基因,并构建烟曲霉pbs2基因突变株,了解该基因对烟曲霉形态学影响以及对渗透压、氧化压力物质敏感性的变化.方法 通过基因同源性比对,在烟曲霉基因组找出
【基金项目】
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John E.Fogarty International Center-NIH-NIAID基金;
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目的 克隆烟曲霉pbs2基因,并构建烟曲霉pbs2基因突变株,了解该基因对烟曲霉形态学影响以及对渗透压、氧化压力物质敏感性的变化.方法 通过基因同源性比对,在烟曲霉基因组找出与酿酒酵母pbs2基因同源的序列,分析其结构并通过PCR扩增烟曲霉pbs2基因连同其上下游各约1.0 kb的DNA片段,将该片段重组到质粒pDHt/SK中形成PA,再通过PCR扩增pyrG作为筛选标记插入到PA的pbs2基因开放阅读框架(ORF)中,构建好pbs2基因敲除载体PB.将敲除载体转化到根瘤农杆菌,再利用ATMT法转化嘧啶营养缺陷株烟曲霉AF293.1,筛选出烟曲霉pbs2基因缺陷株△Pbs2.观察突变株和野生株AF293在基础培养基上的生长速度并测定二者对渗透压、氧化压力物质敏感性的变化.结果 经过SMART软件分析发现烟曲霉pbs2基因编码一种磷酸转移酶.在基础培养基上△pbs2生长速度同野生株间差异无统计学意义(P＞0.05),但在氧化压力和渗透压的信号传导中,△pbs2对氧化压力和渗透压的敏感性较野生株AF293敏感.结论 烟曲霉中pbs2基因不仅参与渗透压的传导,还参与氧化压力的传导,但只参与传导特定的氧化压力.
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