【摘 要】
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利用Bac-to-Bac杆状病毒载体表达系统将人生长激素(humah growth hormone,hGH)基因cDNA克隆至转移载体pFastBac1中,得到pFastBac-hGH,再将其转化进入含穿梭载体Bacmid的受体
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利用Bac-to-Bac杆状病毒载体表达系统将人生长激素(humah growth hormone,hGH)基因cDNA克隆至转移载体pFastBac1中,得到pFastBac-hGH,再将其转化进入含穿梭载体Bacmid的受体菌DH10Bac中,发生转座作用,得到含hGH基因的重组穿梭载体rBacmid-hGH.纯化DNA,直接转染培养的昆虫细胞Sf9,得到重组病毒rAcV-Bac-hGH.经酶切PCR及Southern杂交鉴定,hGH基因正确地插入病毒基因组的多角体蛋白基因启动子下,SDS-PAGE测得产物蛋白分子量为22 kD左右.用免疫化学发光法测得转染上清中hGH表达水平可达18μg/ml,与用传统的BEVS表达hGH相比,转染上清中hGH表达水平提高400倍以上.
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