【摘 要】
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背景:供体细胞的示踪始终是干细胞移植研究中面临的一个重要问题,以往用于干细胞移植的示踪技术主要有核素、5-溴脱氧尿嘧啶核苷、绿色荧光蛋白、Hoechst和荧光原位杂交等.目
【机 构】
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中山大学附属第一医院康复医学科,广东省广州市,510080中山大学附属第一医院神经内科,广东省广州市,510080;
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背景:供体细胞的示踪始终是干细胞移植研究中面临的一个重要问题,以往用于干细胞移植的示踪技术主要有核素、5-溴脱氧尿嘧啶核苷、绿色荧光蛋白、Hoechst和荧光原位杂交等.目的:探讨CM-Dil作为骨髓干细胞移植示踪剂的可行性和示踪效果.设计、时间及地点:细胞学体内观察,于2004-10/2007-12在中山大学附属第一医院神经科实验室完成.材料:四五周龄雄性DL小鼠80只为供体,2月龄遗传性肝功能障碍模型TX小鼠40只为受体,均由澳大利亚Dean教授馈赠.CM-Dil为Molecular Probes公司产品.方法:全骨髓法体外分离培养供体鼠骨髓干细胞,加入CM-Dil行荧光标记,无菌条件下经尾静脉注入已放疗的受体鼠体内,注射悬液量为0.2 mL/只,细胞数1.2×107个/只,于移植后不同时间取肝脏标本制备切片.主要观察指标:荧光倒置显微镜下观察CM-Dil标记细胞情况,流式细胞仪测定荧光标记率.供体细胞移植后在受体鼠肝脏的示踪.PCR半定量分析供体细胞在受体鼠肝脏中的比例.结果:荧光显微镜下CM-Dil标记的骨髓干细胞呈红色荧光,CM-Dil标记率为99.9%.在受体鼠肝脏组织内,CM-Dil的荧光在移植后第1天即可看到,渐增多,第4周达高峰,后渐下降.移植后第7天可检测到Sry基因,随后其变化趋势同CM-Dil荧光.结论:CM-Dil是良好的骨髓干细胞移植示踪剂,第4周时示踪效果最为显著.
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