【摘 要】
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应用氯化铯-超离心法从抗人纤维蛋白单克隆抗体SZ-63杂交瘤细胞抽取总RNA,经Oligo(dT)纤维素柱层析分离出mRNA。以mRNA为模板,分别以3’VH和3’TCk为逆转录引物,在M-MLV逆转
【机 构】
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苏州医学院,苏州医学院,苏州医学院
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应用氯化铯-超离心法从抗人纤维蛋白单克隆抗体SZ-63杂交瘤细胞抽取总RNA,经Oligo(dT)纤维素柱层析分离出mRNA。以mRNA为模板,分别以3’VH和3’TCk为逆转录引物,在M-MLV逆转录酶作用下,合成重链可变区和轻链可变区第一条链cDNA。然后,采用PCR技术,扩增出了SZ-63重链和轻链可变区基因。将其分别克隆至pUC18载体中,
Total RNA was extracted from anti-human fibrin monoclonal antibody SZ-63 hybridoma cells by cesium chloride-ultracentrifugation and mRNA was isolated by Oligo (dT) cellulose column chromatography. Using mRNA as a template, 3’VH and 3’TCk were used as reverse transcription primers respectively to synthesize the first strand cDNA of the heavy chain variable region and the light chain variable region under the action of M-MLV reverse transcriptase. Then, by PCR, SZ-63 heavy and light chain variable region genes were amplified. They were separately cloned into pUC18 vector,
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