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在pH 4.5的乙酸-乙酸钠缓冲溶液中,肝素钠与夜蓝之间强烈的相互作用使夜蓝褪色,据此提出了分光光度法测定肝素钠的方法。对反应体系酸度、夜蓝用量、反应时间等条件做了试验并予以优化,对夜蓝与肝素钠的反应机理进行了初步地探讨。在最大吸收波长618 nm处吸光度的差值（ΔA）与肝素钠的质量浓度在2.0 mg.L-1范围以内呈线性关系。方法用于测定肝素钠注射剂中肝素钠的含量,加标回收率在100.3%～101.0%之间。