目的:联用设定底物浓度下初速度（initial velocity,V_i）和过程分析法所得酶最大反应速度（maximal reaction rate,V_m）与米氏常数（Michaelis-Menten constant,K_m）比值（V_m/K_m）,据米氏方程推算酶的K_m和V_m。方法:以苛求芽孢杆菌尿酸酶（Bacillus fastidious uricase,BFU）及其突变体（A1R,A1R/V144A）、牛小肠碱性磷酸酶（calf intestinal alkaline phosphatase,CIAP）及大肠杆菌碱性磷酸酶突变体R168K为模型。用A_{293 nm}记录尿酸酶反应曲线、A_{450 nm}记录碱性磷酸酶水解4-硝基-1-萘基磷酸酯（4-nitro-1-naphthyl phosphate,4NNPP）反应曲线;以反应时间为自变量、用积分速度方程拟合不超过10%K_m初始底物浓度下酶反应曲线测定V_m/K_m,分析设定底物浓度下初速度反应数据确定初速度V_i;据相同酶量V_i和V_m/K_m按米氏方程计算K_m;据所得V_m/K_m和K_m推算V_m。结果:以E-H（Eadie-Hofstee）法分析50%²00%K_m底物浓度下V_i所得K_m均值为其参考值;联用策略测定V_i所设定的底物浓度越高,则所得K_m相对偏差越小;测定V_i所设定的底物浓度从35%K_m逐渐升高到120%K_m,所得K_m趋于稳定且相对偏差不超过20%。据此联用策略发现,苛求芽孢杆菌尿酸酶在生理pH下活性降低的原因不是其K_m明显升高,而是其V_m下降。结论:当底物溶解度低于K_m时,这种联用策略更适合测定酶的K_m和V_m。