论文部分内容阅读
从美国Wyeth公司引进pAd5△E3载体，将乙型肝炎病毒表面抗原基因（HBV S），PreS2+S，腺病毒晚期表达盒+HBV S基因插入E3区，与EcoR I消化的Ad5 DNA A片段共转染细胞获得重组腺病毒，相应命名为rAd5S，rAd5MS，rAd5S2S。对所获得的重组病毒进行聚合酶链反应（PCR）分析，证实重组病毒中含有目的基因。用ELISA分析了rAd5MS的表达量，其病变细胞和上清液滴度均为1∶4，表明表达产物能分泌到细胞外，而另两株重组病毒ELISA为阴性。进一步放射免疫检测表明，三株重组病毒S抗原皆为阳性，结果说明E3区启动子能表达外源基因，所构建的腺病毒晚期表达盒能显著提高表达效率。实验还同时探讨了重组病毒表达特性和重组病毒遗传稳定性，并发现只要5型腺病毒DNA酶切完全，不分离、纯化EcoR I消化的A片段，共转染中也不会出现野毒株背景问题。