探讨人脐带间充质干细胞(hUMSCs)外泌体对高糖诱导人脐静脉内皮细胞(hUVECs)功能的影响。

酶消化法原代培养hUMSCs和hUVECs，传代扩增至第3代，采用流式细胞仪分别鉴定2种细胞表面标志物；收集培养的第3代hUMSCs无血清培养基，提取外泌体，在电镜下观察其超微结构，并用流式细胞分析仪鉴定其表面标志物；体外培养第3代hUVECs分为对照组、高糖组(20 mmol/L)、外泌体＋高糖组(20 mmol/L)、miR－22抑制剂(50 nmol/L)＋高糖组(20 mmol/L)，孵育24 h后采用Annexin V/PI双染流式细胞术观察hUVECs凋亡，四甲基偶氮唑蓝(MTT)法观察各组细胞的增殖能力，Transwell系统中观察各组细胞的迁移功能，成血管实验检测各组内皮细胞功能。

流式细胞术检测第3代hUMSCs的表面标志物CD₁₀₅、CD₇₃、CD₉₀呈高表达；同时检测第3代hUVECs表面标志物CD₃₀₉、CD₃₁、CD₃₄呈高表达，提示分离培养的hUMSCs和hUVECs具有间充质干细胞(mesenchymal stem cells，MSCs)和内皮细胞(endothelial cells，ECSs)特异性表型特征。外泌体扫描电镜观察可见大小不一的球状膜性结构，且流式细胞仪检测CD₆₃、CD₁₀₅、CD₇₃、CD₉₀、CD₄₄呈阳性表达。MTT法检测各组细胞增殖结果：对照组、高糖组、miR－22抑制剂＋高糖组、外泌体＋高糖组细胞存活率分别为(99.0±1.6)%、(75.0±2.2)%、(66.0±1.8)%、(95.0±2.6)%，与对照组比较，高糖组和miR－22抑制剂＋高糖组细胞增殖明显下降，差异均有统计学意义(t＝28.271，P<0.05；t＝43.213, P<0.01),外泌体＋高糖组细胞增殖无明显下降，差异无统计学意义(t＝2.001，P>0.05)。流式细胞仪检测各组细胞凋亡结果：对照组、高糖组、miR－22抑制剂＋高糖组、外泌体＋高糖组细胞凋亡率分别为16.44%、52.67%、45.92%、17.58%，与对照组比较，高糖组和miR－22抑制剂＋高糖组细胞凋亡率明显增高，差异均有统计学意义(t＝－13.756、－16.489，均P<0.01),外泌体＋高糖组细胞凋亡率略有增高，差异无统计学意义(t＝－2.182，P>0.05)。Transwell系统中观察细胞的迁移功能：对照组、高糖组、miR－22抑制剂＋高糖组、外泌体＋高糖组细胞迁移数量分别为834.5个、295.8个、252.2个、779.5个，与对照组比较，高糖组和miR－22抑制剂＋高糖组细胞迁移数量明显减少，差异均有统计学意义(t＝18.280、27.266，均P<0.01),外泌体＋高糖组细胞迁移数量略有减少，差异无统计学意义(t＝1.985，P>0.05)。体外成管实验结果：对照组、高糖组、miR－22抑制剂＋高糖组、外泌体＋高糖组细胞成管数量分别为29.8个、13.3个、11.3个、29.6个，与对照组比较，高糖组和miR－22抑制剂＋高糖组细胞成管数量明显减少，差异均有统计学意义(t＝9.030，P<0.05；t＝10.671，P<0.01),外泌体＋高糖组细胞成管数量略有减少，差异无统计学意义(t＝0.083，P>0.05)。

hUMSCs外泌体可有效抑制高糖诱导hUVECs的凋亡、促进细胞增殖、迁移和血管再生作用，为寻找糖尿病微血管病变治疗的新靶点提供实验依据。