【摘 要】
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目的基因经pEE12.4质粒扩增,脂质体Free Style TM MAX转染至中国仓鼠卵巢细胞(CHO-细胞),构建出细胞株.细胞株经50μmol/L L-Methionine Sulfoximine加压筛选、培养基、添加
【机 构】
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亚宝药业集团股份有限公司研发部,山西大学分子科学研究所化学生物学与分子工程教育部重点实验室,
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目的基因经pEE12.4质粒扩增,脂质体Free Style TM MAX转染至中国仓鼠卵巢细胞(CHO-细胞),构建出细胞株.细胞株经50μmol/L L-Methionine Sulfoximine加压筛选、培养基、添加剂等优化后,最终获得活性蛋白表达量高达58.54mg/L的细胞株,培养液纯化后,目的蛋白在SDS-PAGE为一条带,HPLC纯度为96.5%.
The target gene was amplified by pEE12.4 plasmid and transfected into Chinese hamster ovary cells (CHO-cells) by lipofectamine Free Style TM MAX to construct cell lines.The cell lines were selected by pressing with 50μmol / L L-Methionine Sulfoximine and cultured After optimizing the medium, additives and so on, the cell line with the highest expression level of 58.54 mg / L of active protein was finally obtained. After purification, the target protein was a band on SDS-PAGE and the HPLC purity was 96.5%.
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