一种改进的重组腺病毒载体的包装和克隆纯化方法

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目的:重组腺病毒载体是目前使用最多的病毒载体之一。常用的AdEasy^TM包装系统在制备条件复制型腺病毒时易混有野生型腺病毒或可复制型腺病毒(RCA),在HEK293细胞中包装出的重组腺病毒必须经过2~3轮噬斑的筛选,费时费力。本实验拟对常规包装方法进行改进。方法:将腺病毒载体质粒转染至HEK293细胞过程中的液体培养基更换为琼脂糖凝胶的混合培养液,因为凝胶形成的阻碍,包装出的病毒不能通过细胞一培养液一细胞的方式进行扩散,只能依靠细胞一细胞的方式来扩展而形成病灶(噬斑);然后随机挑选单个噬斑进行PCR鉴定
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