【摘 要】
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将CFA/Ⅰ结构基因(cfaABCE)克隆到载体pJRD184上构建了质粒pJGX15A,并将其转入大肠杆菌topA野生株E.coli HB101和topA缺陷株E.coli DM800中.Western blot测定的结果表明,在CF
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将CFA/Ⅰ结构基因(cfaABCE)克隆到载体pJRD184上构建了质粒pJGX15A,并将其转入大肠杆菌topA野生株E.coli HB101和topA缺陷株E.coli DM800中.Western blot测定的结果表明,在CFA/Ⅰ的正调控基因cfaD基因缺失时,两株重组菌株都能够表达CFA/Ⅰ抗原.分别抽提两个重组菌株对数前期和对数中期的质粒pJGX15A DNA,并对其进行氯喹琼脂糖凝胶电泳分析,结果显示E.coli DM800细胞中质粒pJGX15A的负超螺旋水平比野生型细胞E.coli HB101中的较低.同时,菌落免疫酶斑分析的结果显示DM800受体菌中CFA/Ⅰ的表达水平比HB101受体菌中的表达水平高.实验结果表明,CFA/Ⅰ结构基因的表达与DNA负超螺旋水平有明显的负相关性,与负超螺旋促进基因表达的看法不同.
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