【摘 要】
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旨在制备共表达丙型肝炎病毒(Hepatitis C virus,HCV)结构蛋白及分泌型荧光素酶Gluc慢病毒VSVppHCV。通过构建共表达HCV结构蛋白及分泌型荧光素酶Gluc的慢病毒表达载体pCSGlu
【机 构】
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中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所; 内蒙古医科大学,微生物教研室;
【基金项目】
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国家自然科学基金(81373229);传染病科技重大专项(2009ZX10004-705,-715)
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旨在制备共表达丙型肝炎病毒(Hepatitis C virus,HCV)结构蛋白及分泌型荧光素酶Gluc慢病毒VSVppHCV。通过构建共表达HCV结构蛋白及分泌型荧光素酶Gluc的慢病毒表达载体pCSGluc2aCE1E2,与包膜质粒pVSVG,包装质粒pHR′CMVΔ8.2共转染HEK 293T的方式获取慢病毒,将慢病毒感染细胞后,对细胞上清中Gluc荧光素酶活性、细胞中HCV特异蛋白的表达等进行表达鉴定。结果表明:浓缩后获得的慢病毒浓度为1×108 TU/mL,电镜负染观察到直径约为100nm带包膜的浓缩慢病毒颗粒;慢病毒VSVpp-HCV感染细胞后,细胞内HCV特异蛋白及上清中Gluc荧光素酶的表达呈平行关系。因此通过检测Gluc荧光素酶的表达水平可反映HCV结构蛋白表达水平,这为建立基于慢病毒感染的带有报告基因的HCV转基因小鼠模型提供了基础。
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