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目的 构建短发夹RNA(shRNA)/mdr1的质粒表达载体并验证其体外表达效率.方法 按照pSUPER的设计要求合成mdr1基因RNAi靶序列的64 bp寡核苷酸序列,退火后双酶切法(Bgl Ⅱ和Hind Ⅲ)克隆,得到质粒pSUPER-shRNA/mdr1,转染感受态大肠杆菌,筛选阳性克隆,测序证实后扩增培养并提取,然后转染融合达90%以上的HepG2/mdr1细胞,阴性载体为对照组,实时聚合酶链反应(Real-time PCR)、流式细胞术检测mdr1基因mRNA、P-gp表达、细胞耐药性等功能变化.结果 成功构建质粒载体pSUPER-shRNA/mdr1,基因测序证实靶序列插入正确;HepG2/mdr1-si组mdr1基因的mRNA表达水平是耐药株HepG2/mdr1组的56分之一;HepG2/mdr1-si组细胞和阴性对照组HepG2/mdr1细胞的P-gp表达率分别为11.0%和98.6%,P＜0.05;HepG2/mdr1组细胞耐药倍数从62.5下降到1.4,相对逆转效率99.34%;细胞内DNR累积量也明显增加,与对照组比较(79.32%比37.96%),P＜0.05.结论 多药耐药基因mdr1质粒表达载体pSU-PER-shRNA/mdr1能在HepG2/mdr1内稳定表达,并逆转其耐药性。