【摘 要】
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为进一步研究鲤疱疹病毒Ⅱ型 ( Cyprinid herpesvirus 2, CyHV-2) ORF4蛋白的功能, 通过PCR扩增CyHV-2 ORF4基因, 并构建重组穿梭质粒pFastBac HTA-ORF4, 将其转化至大肠杆菌
【机 构】
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大连海洋大学农业农村部北方海水增养殖重点实验室,盐城工学院海洋与生物工程学院
【基金项目】
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江苏省自然科学基金青年基金(BK20181053),江苏省农业科技自主创新资金项目(CX(18)3028),盐城工学院人才引进项目(xjr2019044)。
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为进一步研究鲤疱疹病毒Ⅱ型 ( Cyprinid herpesvirus 2, CyHV-2) ORF4蛋白的功能, 通过PCR扩增CyHV-2 ORF4基因, 并构建重组穿梭质粒pFastBac HTA-ORF4, 将其转化至大肠杆菌DH10 Bac感受态细胞后获得重组杆粒Bacmid-ORF4; 采用脂质体法转染Sf9细胞后, 利用间接免疫荧光法 ( IFA) 和West-ern blot鉴定重组蛋白, 采用His亲和层析柱纯化重组蛋白, 并通过小鼠免疫试验分析其免疫原性.结果表明: 转染72 h后Sf9细胞逐渐呈现出细胞变圆、细胞核明显增大的形态变化; 间接免疫荧光结果显示, 重组杆状病毒感染的Sf9细胞中出现了明显的绿色荧光; Western blot结果显示, 纯化的CyHV-2 ORF4蛋白能够与抗His单抗发生特异性反应; 小鼠免疫试验显示, 纯化的CyHV-2 ORF4蛋白能诱导小鼠产生特异性免疫反应.研究表明, 本研究中获得的CyHV-2 ORF4蛋白有较好的免疫原性, 为CyHV-2 ORF4蛋白的功能解析提供了良好材料.
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