论文部分内容阅读
目的探讨外源性硫化氢(hydrogen sulfide,H2S)对肝癌细胞系Hep G2细胞自噬的影响及其机制。方法应用外源性H2S供体——硫氢化钠(sodium hydrosulfide,Na HS)处理Hep G2细胞,采用Western blotting方法检测自噬相关蛋白微管相关蛋白轻链3-Ⅱ(microtubule-associated light chain 3-Ⅱ,LC3-Ⅱ)表达变化,Real-time PCR方法检测自噬相关基因beclin1和atg5的mRNA表达浓度,免疫荧光方法观察Hep G2细胞自噬颗粒变化、凋亡相关蛋白M30及凋亡小体变化,Annexin V/PI双标记流式细胞术检测细胞凋亡情况。结果瞬时转染绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP)-LC3质粒后,发现Na HS处理组Hep G2细胞内GFP-LC3Ⅱ绿色荧光斑点明显增加,M30阳性细胞率[(8.37±1.03)%],与对照组[(2.14±0.69)%]比较差异有统计学意义(P<0.05);同时,高倍镜下观察结果显示,Na HS处理后细胞核异染色质明显增加,凋亡小体形成。Annexin V-FITC/PI双染结果显示Na HS处理组细胞凋亡率高于对照组[(16.32±0.28)%vs(0.67±0.09)%],差异有统计学意义(P<0.05)。Real-time PCR显示Na HS可增加Hep G2细胞beclin1和atg5 mRNA表达水平,LC3-Ⅱ表达明显增加。且自噬特异性抑制剂3-甲基腺嘌呤(3-methyladenine,3-MA)可降低Na HS所致的beclin1和atg5的mRNA表达。结论外源性硫化氢能够上调自噬相关基因beclin1和atg5表达,进而促进Hep G2细胞发生自噬,并诱导细胞凋亡。