【摘 要】
：
目的 探究spycatcher可作为一种新的高效促溶标签蛋白.方法 通过分子生物学方法将spycatcher基因与包涵体PD1及MPD1基因融合构建到表达载体PET21a中,然后通过ELISA和fortebio
【机 构】
：
南华大学医学院组织胚胎学教研室,湖南衡阳421001;南华大学医学院细胞与组织工程研究室,湖南衡阳421001;西北农林科技大学动物医学院,陕西杨凌,712100
论文部分内容阅读
目的 探究spycatcher可作为一种新的高效促溶标签蛋白.方法 通过分子生物学方法将spycatcher基因与包涵体PD1及MPD1基因融合构建到表达载体PET21a中,然后通过ELISA和fortebio验证其融合蛋白活性.结果 spycatcher与包涵体靶蛋白PD1及MPD1融合后为可溶性表达,融合蛋白纯化后能够与其配体PDL1有效结合.结论 Spycatcher可作为一种新的高效促溶标签蛋白,这将为不可溶表达蛋白的表达纯化带来诸多便利.“,”Objective To explore if spycatcher can be used as a new efficient solubilization of tagged protein.Methods Fusing the genes of spycatcher with Pd1 and MPD1(inclusion-body proteins) into the expression vector of PET21a using molecular biology method,the activity of the fusion proteins was verified by ELISA and fortebio.Results The fused protein of spycatcher and Pd 1 and MPD 1 was soluble and effectively affinity with its ligand PDL1.Conclusion Spycather can be used as a new high efficient soluble lable protein,was convenience for the expression and purification of insoluble protein.
其他文献
采用原位水热法在铝合金AA5005表面制备镁铝层状双氢氧化物(LDH)涂层;利用X射线衍射、傅里叶红外、扫描电子显微镜以及能谱仪研究涂层的化学成分、表面形貌及物相;考察溶液p
生于德累斯顿的女画家莫德松·贝克是德国表现主义的锋头人物之一。她在柏林接受的艺术教育,但在
Born in Dresden, the painter Maudsson Baker is one of the leading Ger
目的 探讨制备纯化重组蛋白的酶切方法,比较不同蛋白纯化方法的差异.方法 在大肠杆菌BL-21中分别诱导表达pGEX-6p-3/CT1,pGEX-6p-3/CT3,pGEX-6p-3/CaM,pGEX-6p-3/CaMK Ⅱ.采用超声破碎、B-per试剂以及B-per试剂加变性复性试剂盒等方法制备带GST标签的融合蛋白,进一步在不同条件下使用蛋白酶进行酶切获得相应蛋白.将制备得到的蛋白进行SDS-PAGE电泳鉴定,同时,使用pull-down方法对蛋白活性进行鉴定.结果 采用B-per试剂以及变性再复性试剂
目的 观察HS1相关蛋白X-1(HS1-associated protein X-1,HAX1)对骨肉瘤细胞凋亡的影响.方法 应用基因沉默技术在骨肉瘤细胞系MG63中下调HAX1基因的表达,并且通过Western blot实验与免疫荧光实验检测基因沉默效率;应用MTT方法及克隆形成实验,评价沉默HAX1基因对MG63细胞增殖能力的影响;流式细胞术检测细胞凋亡并通过Western blot实验检测下游蛋白的表达变化.结果 沉默HAX1基因抑制人骨肉瘤细胞系MG63的增殖能力与克隆形成能力,流式细胞技术显示沉
最近20年来,新经济地理学得到空前发展。它将空间概念纳入主流分析框架中,利用中心-外围模型研究集聚与分散的问题。比较而言,传统的区域经济学更多从区位理论角度,讨论产业
在小学阶段,绝大多数学生第一次接受非母语教育,学生对语言思维模式、语感、语法和表达方式都非常陌生。在此背景下,如果采取单一的知识灌输式教学法,学生较难接受。对此,应
目的 研究TRPV4通道激活对脑胶质瘤大鼠血肿瘤屏障(blood tumor barrier,BTB)通透性的作用效果及机制.方法 制备脑胶质瘤模型,应用伊文氏蓝(EB)渗透评估TRPV4激动剂GSK1016790A作用后血肿瘤屏障通透性的变化;RT-PCR和Westen blot法检测脑胶质瘤组织中质膜微囊结构蛋白caveolin-1 mRNA和蛋白表达的变化.结果 GSK1016790A可引起脑胶质瘤大鼠血肿瘤屏障通透性的改变,灌注15min后BTB通透性开始增加,灌注45min时达高峰,而后有所下降
近年在食品造型中,出现了图案造型与文字造型相结合,“文字”代替传统图案造型的新形式.如传统的“独拼”、“三拼”、“什锦拼”等,可根据宴饮的需要,将原料重新组合拼摆成
目的 构建DOC-1R(deleted in oral cancer-I related)缺失型原核表达载体并纯化其重组蛋白,用于进一步研究DOC-1R互作蛋白及DOC-1R与其相互作用区域.方法 经基因重组技术构建分别缺失DOC-1R N端1/3序列及其C端1/3序列的原核表达载体,经测序鉴定、转化至E.coli BL21菌株后,诱导表达两种缺失型GST-DOC-1R重组蛋白,并获得纯化的重组蛋白.结果 两载体克隆序列及开放阅读框架均正确,经IPTG诱导在35kD处获得重组蛋白,纯化后得到大量GST-D