【摘 要】
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目的构建人CD137-Fc基因的真核表达质粒,并表达有生物学活性的纯化人CD137-Fc融合蛋白.方法从cDNA文库中用PCR扩增CD137全长编码基因,并导入真核表达载体pcDNA3中.测序证实后
【机 构】
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第三军医大学基础医学部,第三军医大学基础医学部
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目的构建人CD137-Fc基因的真核表达质粒,并表达有生物学活性的纯化人CD137-Fc融合蛋白.方法从cDNA文库中用PCR扩增CD137全长编码基因,并导入真核表达载体pcDNA3中.测序证实后,继续用PCR扩增其膜外区cDNA,,酶切后与hIgG1Fc基因一起装入真核表达载体pcDNA3中,转染293T细胞瞬时表达,用夹心ELISA检测其表达情况,经蛋白A亲和纯化,用SDS-PAGE与免疫印迹进行鉴定.结果测序证实构建的CD137与CD137-Fc cDNA阅读框完整,连接部位序列正确;ELISA证
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