【摘 要】
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罗非鱼是世界重要养殖鱼类。近年来罗湖病毒(tilapia lake virus,TiLV)在多个国家流行,对世界罗非鱼养殖业造成严重威胁。中国是罗非鱼第一养殖大国,尽管我国大陆还没有TiLV
【机 构】
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仲恺农业工程学院动物科技学院广东省水环境与水产品安全工程技术研究中心广州市水产病害与水禽养殖重点实验室;
【基金项目】
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国家自然科学基金(31872606,31572657,U1701233);广东省海洋与渔业局基金(GDME-2018C006,D21822202,A201512C003,2015-115);广东省教育厅(KA170500G,TK222001G,KA18058B3,KA1819604)
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罗非鱼是世界重要养殖鱼类。近年来罗湖病毒(tilapia lake virus,TiLV)在多个国家流行,对世界罗非鱼养殖业造成严重威胁。中国是罗非鱼第一养殖大国,尽管我国大陆还没有TiLV的正式报道,鉴于尼罗罗非鱼吉富品系是我国重要的罗非鱼养殖品种,其对TiLV的感染特性研究具有重要意义。本研究采用德国弗里德里希洛弗勒研究所Sven Bergmann博士赠送的TiLV对尼罗罗非鱼吉富品系进行人工感染,随后在肝脏组织中克隆和测定了TiLV第6片段基因组。罗湖病毒第6片段基因组c DNA全长1 044 bp,开放读码框(ORF)为954 bp,编码一个317个氨基酸蛋白,预测分子量为36.38 ku;5′非编码区(NCR)为19 bp,3′非编码区(NCR)为972 bp。系统进化树分析表明该蛋白属于TiLV核蛋白(nucleoprotein,NP)。随后我们在大肠杆菌中表达和提纯了GST融合NP蛋白,在新西兰大白兔上制备了多克隆抗体。通过酶联免疫吸附实验(ELISA)检测抗体效价为1:51 200,且抗体可特异性识别感染组织中的病毒NP蛋白。对罗非鱼不同组织进行苏木精-伊红(H.E)染色观察,发现肝脏组织坏死并形成合胞体,脾脏部分细胞出现空泡,坏死,含铁血黄素增多,头肾细胞坏死,鰓丝上皮细胞明显解离脱落,鰓小片黏连,脑组织细胞肿大。通过蛋白印迹法(WB)和免疫组化(IHC)对人工感染TiLV的罗非鱼不同组织进行检测,结果显示,NP蛋白在肝脏、脑、体肾和头肾中均有表达,以肝脏组织中表达最高。为了解罗非鱼对Tilv的免疫反应,通过实时荧光定量PCR (qRT-PCR)测定免疫因子TNF-α和TGF-β在主要免疫器官脾脏和头肾中的表达。研究表明,在感染早期(感染后12~24 h),病毒可显著抑制TNF-α和TGF-β在脾脏和头肾中的表达,也许通过抑制宿主这些免疫因子来促进病毒自身早期的复制。本研究将为进一步解读TiLV的致病机理及其高效防控提供基础。
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