【摘 要】
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目的 探讨新生儿脐血间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)体外分离、纯化、扩增,以及向成骨及脂肪细胞定向诱导分化的方法与条件.方法 无菌条件下收集新生儿脐血60～120
【机 构】
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四川大学华西第二医院血液儿科,成都,610041;四川大学华西医院,生物治疗国家重点实验室·干细胞与组织工程研究室;成都市儿童医院
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目的 探讨新生儿脐血间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)体外分离、纯化、扩增,以及向成骨及脂肪细胞定向诱导分化的方法与条件.方法 无菌条件下收集新生儿脐血60～120 ml,枸橼酸钠抗凝,以Ficoll-Hypaque 淋巴细胞分离液密度梯度法、沉降红细胞后密度梯度法及CD34+免疫磁珠负选法分离单个核细胞(mononuclear cells,MNCs).分离获得的MNCs采用L-DMEM培养基或MesencultTM培养基/10%胎牛血清进行MSCs培养传代,获得第3代集落生长细胞作流式细胞仪表面抗原测定,并向成骨及脂肪细胞定向诱导分化,成骨细胞钙沉积经茜素红染色鉴定,脂肪细胞胞浆油滴经油红染色鉴定.结果 经沉降红细胞后分离的MNCs,使用MesencultTM培养基/10%胎牛血清培养成功率高,第3代可出现明显的集落生长,而另两种方法分离培养的细胞则难以形成集落;集落细胞表面抗原测定表达CD29、CD59、CD71而不表达CD34、CD45及HLA-DR等分子.成骨定向诱导分化的集落细胞经茜素红染色胞浆中出现有大量的钙沉积;成脂肪定向诱导分化的集落细胞油红染色示胞浆充满油滴空泡.结论 新生儿脐血中可分离出MSCs,并可在体外进行培养扩增.以甲基纤维素沉降红细胞后密度梯度离心分离的MNCs培养较为有效,集落细胞表达基质细胞表面抗原,能够向成骨细胞及成脂肪细胞定向诱导分化.
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