尿道致病性大肠杆菌新基因R049特征的研究

来源 :中华微生物学和免疫学杂志 | 被引量 : 0次 | 上传用户:chenchao198339
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目的 明确从国内分离的尿道致病性大肠杆菌(UPEC) 132中发现的新基因R049的特征及其表达蛋白在菌体内的定位。方法 提取UPEC132染色体DNA,鸟枪法构建文库,高通量焦磷酸法测序,Newbler软件拼接,进行生物信息学分析,确定R049相关片段的特征。提取UPEC132的内膜和外膜蛋白,与其全菌裂解物一起进行SDS-PAGE,用R049重组蛋白抗血清进行Western blot,确定R049表达蛋白的菌体内位置。结果 成功构建UPEC 132染色体文库,获取R049-contig169022 bp,与UPEC536染色体第233074至451502位碱基序列同源性较高,其中含有R049基因的20773 bp片段替代相当于UPEC536染色体上PAIⅢ536的位置,G+C含量为46.97%,两端具有正向重复序列,并与插入元件整合酶基因和thrW tRNA基因相邻,包含25个ORF,命名为R049 -GI。R049基因位于R049-GI的第13个ORF。SDS-PAGE和Western blot分析显示R049基因表达相对分子质量为47.0× 103蛋白是UPEC132的外膜蛋白。结论 R049基因编码细菌的外膜蛋白,是UPEC132通过基因水平转移获得的染色体基因组岛的组成部分。

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