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摘 要：文章建立高效液相色谱法（HPLC）测定藏红花药材中有效成分含量，并与伊朗进口的藏红花中西红花苷-Ⅰ和西红花苷-Ⅱ的含量进行对比。文章以九寨沟藏红花为研究对象;采用反向色谱柱Eclipse XDB-C18（4.6×250mm 5μm）检测;流动相：乙腈-水（25：75）;流速：1.0mL·min-1;检测波长：440nm;柱温：40℃。藏红花样品总苷含量分别为18.1%、19.1%、20.7%，伊朗样品藏红花总苷含量为16.0%。九寨沟藏红花质量水平高于伊朗藏红花有效成分含量，均满足总苷含量>10%的规定。
关键词：藏红花;有效成分;九寨沟;含量测定;高效液相色谱
中图分类号：R927.2 文献标识码：A 文章编号：1674-1064（2021）05-003-02
DOI：10.12310/j.issn.1674-1064.2021.05.002
藏红花（Crocus sativus L.），又称西红花或番红花，为鸢尾科番红花属植物，是一种名贵中药，其具有活血化瘀、凉血解毒、清肝明目等效用[1]。藏红花最早由希腊人种植，后来通过印度、尼泊尔等地区进口，再通过西藏销往全国各地[2]。藏红花通过球茎进行无性繁殖，以三根柱头入药，具有降血脂[3]、抗肿瘤[4-5]、免疫调节[6]、防止骨质疏松[7]、抑制糖尿病[8]、抗氧化、抗炎[9-10]、保护视神经与视网膜等作用[11]。近年来，藏红花在上海、浙江、西藏等地均被引种栽培[12]，因土质、气候等差异，各地藏红花质量差异较大，本研究主要是对九寨沟的3个藏红花样品有效成分含量进行测定，并与伊朗藏红花作比较，以考察九寨沟藏红花药材的质量，可供有关研究参考。
1 仪器与材料
Agilent 1260高效液相色谱仪（安捷伦科技有限公司）、G1315D DAD紫外可见检测器、G1311C四元梯度混合泵、DT230柱温箱;EclipseXDB-C18（4.6×250mm 5μm）色谱柱;SB25-12DNT超声波清洗器（宁波新芝生物科技股份有限公司）;BSA223S电子天平（千分之一赛多利斯科学仪器有限公司）。
西红花苷-Ⅰ对照品（批号MUST-19071510，质量分数为99.07%）、西红花苷-Ⅱ对照品（批号MUST-19102910，质量分数为98.28%）（成都曼思特生物科技有限公司）;乙腈为色谱纯（赛默飞世尔科技有限公司）;超纯水;供试样品分别为伊朗藏红花样品、九寨沟藏红花样品。
2 方法与结果
2.1 色谱条件
色谱柱：Eclipse XDB-C18（4.6×250mm 5μm）;流动相：乙腈-水（25：75）;流速：1.0mL·min-1;检测波长为：440nm;柱温：40℃;进样量：10μL。
2.2 溶液制备
2.2.1 对照品溶液的制备
精密称定西红花苷-Ⅰ、西红花苷-Ⅱ对照品适量，加稀乙醇（取乙醇529mL，加水至1 000mL）分别制成浓度为30μg/mL和12μg/mL的溶液即得。
2.2.2 供试品溶液的制备
干燥样品，取适量于研钵中研细，过50目筛，精密称取10mg样品粉末于50mL棕色容量瓶中，加适量稀乙醇溶解，置冰浴中超声处理20min，放至室温，定容至刻度，摇匀，经微孔滤膜过滤，取续滤液即得。
2.3 线性关系考察
精密吸取西红花苷-Ⅰ对照品溶液（200μg/mL）0.0、0.5、1.0、1.5、2.0、2.5mL，西红花苷-Ⅱ对照品溶液（200μg/mL）0.0、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0mL，置10mL量瓶中，加稀乙醇定容至刻度，摇匀，在“2.1”色谱条件下，进样10μL，测定峰面积。以峰面积为纵坐标，对照品含量为横坐标，绘制标准曲线。西红花苷-Ⅰ和西红花苷-Ⅱ的回归方程分别为：Y=84.109x-128.410（r=0.9936，n=6），Y=42.221x+13.111（r=0.9971，n=6），结果表明西红花苷-Ⅰ在0～50.00μg/mL，西红花苷-Ⅱ在0～20.00μg/mL范围内呈现良好的线性关系。
2.4 加样回收率实验
精密称定已知含量的藏红花样品5份各10mg。分别精密加入西红花苷-Ⅰ、西红花苷-Ⅱ对照品溶液（200μg/mL）4.5mL、2.2mL。依法测定，计算西红花苷-Ⅰ平均回收率为100.16%，RSD为1.87%;西红花苷-Ⅱ平均回收率为100.78%，RSD为1.95%，结果如表1所示。
2.5 精密度试验
精密吸取九寨沟2020年1号供试品溶液10μL，参照“2.1”色谱条件连续进样5次，测得西红花苷-Ⅰ、西红花苷-Ⅱ峰面积的RSD%（n=5）分别为1.70和0.73，表示仪器精密度良好。
2.6 稳定性试验
精密吸取九寨沟2020年1号供试品溶液10μL注入高效液相色谱仪，分别在0、12、24、36、48h进样，测其西红花苷-Ⅰ、西红花苷-Ⅱ峰面积，计算得西红花苷-Ⅰ峰面积RSD%（n=5）=1.94、西红花苷-Ⅱ峰面积RSD%（n=5）=1.64。结果表明供试品溶液在48h内稳定。
2.7 重現性试验
精密称取6份2020年3号样品各10mg，按“2.2.2”供试品溶液制备方法进行操作，精密吸取10μL注入高效液相色谱中进行测定，测其西红花苷-Ⅰ、西红花苷-Ⅱ峰面积，计算得西红花苷-I峰面积RSD%（n=6）=1.98、西红花苷-Ⅱ峰面积RSD%（n=6）=1.53，结果表明重现性良好。
2.8 样品含量测定
表2 不同样品藏红花中西红花苷含量比较 分别精密吸取伊朗、九寨沟藏红花供试品溶液10μL，将其注入高效液相色谱仪进行含量测定。采用外标法对西红花苷-Ⅰ、西红花苷-Ⅱ及总苷含量进行计算。结果显示，九寨沟藏红花有效成分含量较高，三个样品西红花苷总含量分别为18.1%、19.1%、20.7%，且有效成分含量均高于伊朗进口藏红花有效成分含量，结果如表2所示。
3 结语
研究结果表明，九寨沟藏红花样品均满足总苷>10%的药典规定，其中2020年3号样品总苷含量最高，为20.7%;2020年1号样品总苷含量最低，为18.1%。此外，九寨沟藏红花有效成分含量均高于伊朗进口藏红花。九寨沟藏红花具有较好的质量品质，表明九寨沟培育基地已经具备了较好的藏红花种植技术手段，这对于国内藏红花引种具有借鉴意义，且为药用领域提供了优质资源。
参考文献
[1] 次仁，尼玛次仁.藏药藏红花组方功效研究[J].中国民族医药杂志，2016，22（1）：48-49.
[2] 程超寰.百草名媛番红花[J].家庭中医药，2019，26（6）：8-11.
[3] 王素莲，黄伟，熊玉卿，等.藏红花降血脂作用的研究进展[J].中国临床药理学，2015（12）：1218-1220.
[4] 刘辉辉，毛碧增.藏红花药理作用及组织培养研究进展[J].药物生物技术，2014，21（6）：593-596.
[5] 蓝天，何俊玲，徐海滨.藏红花素抗肿瘤的研究进展[J].浙江临床医学，2017，19（7）：1372-1373.
[6] 宗春燕.藏红花有效成分药理作用研究进展[J].山东工业技术，2017（16）：252.
[7] 张娜，李林森.藏红花药理作用研究进展[J].药物评价研究，2013，36（5）：394-396.
[8] 王立哲，王振贤，马晓伟.藏红花素对糖尿病所致睾丸组织损伤保护作用的研究[J].天津中医药，2019，36（5）：491-494.
[9] 李姚，王健.藏红花素抑制过氧化氢诱导的视网膜色素上皮细胞凋亡[J].中国中医眼科，2019，29（5）：347-350.
[10] 张晓岩，芦殿香.藏红花活性成分对神经系统疾病的作用[J].中国高原医学与生物学，2020，41（1）：67-72.
[11] SepahiSamaneh，MohajeriSeyedAhmad，HosseiniSeyedehMaryam，et al.Effects of Crocinon Diabetic Maculopathy：A Placebo-Controlled Randomized Clinical Trial[J].American journal of ophthalmology，2018，190：89-98.
[12] 李珅，胡紹玲，汪文成，等.藏红花资源及栽培技术研究概况[J].青海农林科技，2017（3）：38-41.
关键词：藏红花;有效成分;九寨沟;含量测定;高效液相色谱
中图分类号：R927.2 文献标识码：A 文章编号：1674-1064（2021）05-003-02
DOI：10.12310/j.issn.1674-1064.2021.05.002
藏红花（Crocus sativus L.），又称西红花或番红花，为鸢尾科番红花属植物，是一种名贵中药，其具有活血化瘀、凉血解毒、清肝明目等效用[1]。藏红花最早由希腊人种植，后来通过印度、尼泊尔等地区进口，再通过西藏销往全国各地[2]。藏红花通过球茎进行无性繁殖，以三根柱头入药，具有降血脂[3]、抗肿瘤[4-5]、免疫调节[6]、防止骨质疏松[7]、抑制糖尿病[8]、抗氧化、抗炎[9-10]、保护视神经与视网膜等作用[11]。近年来，藏红花在上海、浙江、西藏等地均被引种栽培[12]，因土质、气候等差异，各地藏红花质量差异较大，本研究主要是对九寨沟的3个藏红花样品有效成分含量进行测定，并与伊朗藏红花作比较，以考察九寨沟藏红花药材的质量，可供有关研究参考。
1 仪器与材料
Agilent 1260高效液相色谱仪（安捷伦科技有限公司）、G1315D DAD紫外可见检测器、G1311C四元梯度混合泵、DT230柱温箱;EclipseXDB-C18（4.6×250mm 5μm）色谱柱;SB25-12DNT超声波清洗器（宁波新芝生物科技股份有限公司）;BSA223S电子天平（千分之一赛多利斯科学仪器有限公司）。
西红花苷-Ⅰ对照品（批号MUST-19071510，质量分数为99.07%）、西红花苷-Ⅱ对照品（批号MUST-19102910，质量分数为98.28%）（成都曼思特生物科技有限公司）;乙腈为色谱纯（赛默飞世尔科技有限公司）;超纯水;供试样品分别为伊朗藏红花样品、九寨沟藏红花样品。
2 方法与结果
2.1 色谱条件
色谱柱：Eclipse XDB-C18（4.6×250mm 5μm）;流动相：乙腈-水（25：75）;流速：1.0mL·min-1;检测波长为：440nm;柱温：40℃;进样量：10μL。
2.2 溶液制备
2.2.1 对照品溶液的制备
精密称定西红花苷-Ⅰ、西红花苷-Ⅱ对照品适量，加稀乙醇（取乙醇529mL，加水至1 000mL）分别制成浓度为30μg/mL和12μg/mL的溶液即得。
2.2.2 供试品溶液的制备
干燥样品，取适量于研钵中研细，过50目筛，精密称取10mg样品粉末于50mL棕色容量瓶中，加适量稀乙醇溶解，置冰浴中超声处理20min，放至室温，定容至刻度，摇匀，经微孔滤膜过滤，取续滤液即得。
2.3 线性关系考察
精密吸取西红花苷-Ⅰ对照品溶液（200μg/mL）0.0、0.5、1.0、1.5、2.0、2.5mL，西红花苷-Ⅱ对照品溶液（200μg/mL）0.0、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0mL，置10mL量瓶中，加稀乙醇定容至刻度，摇匀，在“2.1”色谱条件下，进样10μL，测定峰面积。以峰面积为纵坐标，对照品含量为横坐标，绘制标准曲线。西红花苷-Ⅰ和西红花苷-Ⅱ的回归方程分别为：Y=84.109x-128.410（r=0.9936，n=6），Y=42.221x+13.111（r=0.9971，n=6），结果表明西红花苷-Ⅰ在0～50.00μg/mL，西红花苷-Ⅱ在0～20.00μg/mL范围内呈现良好的线性关系。
2.4 加样回收率实验
精密称定已知含量的藏红花样品5份各10mg。分别精密加入西红花苷-Ⅰ、西红花苷-Ⅱ对照品溶液（200μg/mL）4.5mL、2.2mL。依法测定，计算西红花苷-Ⅰ平均回收率为100.16%，RSD为1.87%;西红花苷-Ⅱ平均回收率为100.78%，RSD为1.95%，结果如表1所示。
2.5 精密度试验
精密吸取九寨沟2020年1号供试品溶液10μL，参照“2.1”色谱条件连续进样5次，测得西红花苷-Ⅰ、西红花苷-Ⅱ峰面积的RSD%（n=5）分别为1.70和0.73，表示仪器精密度良好。
2.6 稳定性试验
精密吸取九寨沟2020年1号供试品溶液10μL注入高效液相色谱仪，分别在0、12、24、36、48h进样，测其西红花苷-Ⅰ、西红花苷-Ⅱ峰面积，计算得西红花苷-Ⅰ峰面积RSD%（n=5）=1.94、西红花苷-Ⅱ峰面积RSD%（n=5）=1.64。结果表明供试品溶液在48h内稳定。
2.7 重現性试验
精密称取6份2020年3号样品各10mg，按“2.2.2”供试品溶液制备方法进行操作，精密吸取10μL注入高效液相色谱中进行测定，测其西红花苷-Ⅰ、西红花苷-Ⅱ峰面积，计算得西红花苷-I峰面积RSD%（n=6）=1.98、西红花苷-Ⅱ峰面积RSD%（n=6）=1.53，结果表明重现性良好。
2.8 样品含量测定
表2 不同样品藏红花中西红花苷含量比较 分别精密吸取伊朗、九寨沟藏红花供试品溶液10μL，将其注入高效液相色谱仪进行含量测定。采用外标法对西红花苷-Ⅰ、西红花苷-Ⅱ及总苷含量进行计算。结果显示，九寨沟藏红花有效成分含量较高，三个样品西红花苷总含量分别为18.1%、19.1%、20.7%，且有效成分含量均高于伊朗进口藏红花有效成分含量，结果如表2所示。
3 结语
研究结果表明，九寨沟藏红花样品均满足总苷>10%的药典规定，其中2020年3号样品总苷含量最高，为20.7%;2020年1号样品总苷含量最低，为18.1%。此外，九寨沟藏红花有效成分含量均高于伊朗进口藏红花。九寨沟藏红花具有较好的质量品质，表明九寨沟培育基地已经具备了较好的藏红花种植技术手段，这对于国内藏红花引种具有借鉴意义，且为药用领域提供了优质资源。
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[6] 宗春燕.藏红花有效成分药理作用研究进展[J].山东工业技术，2017（16）：252.
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[12] 李珅，胡紹玲，汪文成，等.藏红花资源及栽培技术研究概况[J].青海农林科技，2017（3）：38-41.