九寨沟藏红花有效成分含量测定

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  摘 要:文章建立高效液相色谱法(HPLC)测定藏红花药材中有效成分含量,并与伊朗进口的藏红花中西红花苷-Ⅰ和西红花苷-Ⅱ的含量进行对比。文章以九寨沟藏红花为研究对象;采用反向色谱柱Eclipse XDB-C18(4.6×250mm 5μm)检测;流动相:乙腈-水(25:75);流速:1.0mL·min-1;检测波长:440nm;柱温:40℃。藏红花样品总苷含量分别为18.1%、19.1%、20.7%,伊朗样品藏红花总苷含量为16.0%。九寨沟藏红花质量水平高于伊朗藏红花有效成分含量,均满足总苷含量>10%的规定。
  关键词:藏红花;有效成分;九寨沟;含量测定;高效液相色谱
  中图分类号:R927.2 文献标识码:A 文章编号:1674-1064(2021)05-003-02
  DOI:10.12310/j.issn.1674-1064.2021.05.002
  藏红花(Crocus sativus L.),又称西红花或番红花,为鸢尾科番红花属植物,是一种名贵中药,其具有活血化瘀、凉血解毒、清肝明目等效用[1]。藏红花最早由希腊人种植,后来通过印度、尼泊尔等地区进口,再通过西藏销往全国各地[2]。藏红花通过球茎进行无性繁殖,以三根柱头入药,具有降血脂[3]、抗肿瘤[4-5]、免疫调节[6]、防止骨质疏松[7]、抑制糖尿病[8]、抗氧化、抗炎[9-10]、保护视神经与视网膜等作用[11]。近年来,藏红花在上海、浙江、西藏等地均被引种栽培[12],因土质、气候等差异,各地藏红花质量差异较大,本研究主要是对九寨沟的3个藏红花样品有效成分含量进行测定,并与伊朗藏红花作比较,以考察九寨沟藏红花药材的质量,可供有关研究参考。
  1 仪器与材料
  Agilent 1260高效液相色谱仪(安捷伦科技有限公司)、G1315D DAD紫外可见检测器、G1311C四元梯度混合泵、DT230柱温箱;EclipseXDB-C18(4.6×250mm 5μm)色谱柱;SB25-12DNT超声波清洗器(宁波新芝生物科技股份有限公司);BSA223S电子天平(千分之一赛多利斯科学仪器有限公司)。
  西红花苷-Ⅰ对照品(批号MUST-19071510,质量分数为99.07%)、西红花苷-Ⅱ对照品(批号MUST-19102910,质量分数为98.28%)(成都曼思特生物科技有限公司);乙腈为色谱纯(赛默飞世尔科技有限公司);超纯水;供试样品分别为伊朗藏红花样品、九寨沟藏红花样品。
  2 方法与结果
  2.1 色谱条件
  色谱柱:Eclipse XDB-C18(4.6×250mm 5μm);流动相:乙腈-水(25:75);流速:1.0mL·min-1;检测波长为:440nm;柱温:40℃;进样量:10μL。
  2.2 溶液制备
  2.2.1 对照品溶液的制备
  精密称定西红花苷-Ⅰ、西红花苷-Ⅱ对照品适量,加稀乙醇(取乙醇529mL,加水至1 000mL)分别制成浓度为30μg/mL和12μg/mL的溶液即得。
  2.2.2 供试品溶液的制备
  干燥样品,取适量于研钵中研细,过50目筛,精密称取10mg样品粉末于50mL棕色容量瓶中,加适量稀乙醇溶解,置冰浴中超声处理20min,放至室温,定容至刻度,摇匀,经微孔滤膜过滤,取续滤液即得。
  2.3 线性关系考察
  精密吸取西红花苷-Ⅰ对照品溶液(200μg/mL)0.0、0.5、1.0、1.5、2.0、2.5mL,西红花苷-Ⅱ对照品溶液(200μg/mL)0.0、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0mL,置10mL量瓶中,加稀乙醇定容至刻度,摇匀,在“2.1”色谱条件下,进样10μL,测定峰面积。以峰面积为纵坐标,对照品含量为横坐标,绘制标准曲线。西红花苷-Ⅰ和西红花苷-Ⅱ的回归方程分别为:Y=84.109x-128.410(r=0.9936,n=6),Y=42.221x+13.111(r=0.9971,n=6),结果表明西红花苷-Ⅰ在0~50.00μg/mL,西红花苷-Ⅱ在0~20.00μg/mL范围内呈现良好的线性关系。
  2.4 加样回收率实验
  精密称定已知含量的藏红花样品5份各10mg。分别精密加入西红花苷-Ⅰ、西红花苷-Ⅱ对照品溶液(200μg/mL)4.5mL、2.2mL。依法测定,计算西红花苷-Ⅰ平均回收率为100.16%,RSD为1.87%;西红花苷-Ⅱ平均回收率为100.78%,RSD为1.95%,结果如表1所示。
  2.5 精密度试验
  精密吸取九寨沟2020年1号供试品溶液10μL,参照“2.1”色谱条件连续进样5次,测得西红花苷-Ⅰ、西红花苷-Ⅱ峰面积的RSD%(n=5)分别为1.70和0.73,表示仪器精密度良好。
  2.6 稳定性试验
  精密吸取九寨沟2020年1号供试品溶液10μL注入高效液相色谱仪,分别在0、12、24、36、48h进样,测其西红花苷-Ⅰ、西红花苷-Ⅱ峰面积,计算得西红花苷-Ⅰ峰面积RSD%(n=5)=1.94、西红花苷-Ⅱ峰面积RSD%(n=5)=1.64。结果表明供试品溶液在48h内稳定。
  2.7 重現性试验
  精密称取6份2020年3号样品各10mg,按“2.2.2”供试品溶液制备方法进行操作,精密吸取10μL注入高效液相色谱中进行测定,测其西红花苷-Ⅰ、西红花苷-Ⅱ峰面积,计算得西红花苷-I峰面积RSD%(n=6)=1.98、西红花苷-Ⅱ峰面积RSD%(n=6)=1.53,结果表明重现性良好。
  2.8 样品含量测定
  表2 不同样品藏红花中西红花苷含量比较   分别精密吸取伊朗、九寨沟藏红花供试品溶液10μL,将其注入高效液相色谱仪进行含量测定。采用外标法对西红花苷-Ⅰ、西红花苷-Ⅱ及总苷含量进行计算。结果显示,九寨沟藏红花有效成分含量较高,三个样品西红花苷总含量分别为18.1%、19.1%、20.7%,且有效成分含量均高于伊朗进口藏红花有效成分含量,结果如表2所示。
  3 结语
  研究结果表明,九寨沟藏红花样品均满足总苷>10%的药典规定,其中2020年3号样品总苷含量最高,为20.7%;2020年1号样品总苷含量最低,为18.1%。此外,九寨沟藏红花有效成分含量均高于伊朗进口藏红花。九寨沟藏红花具有较好的质量品质,表明九寨沟培育基地已经具备了较好的藏红花种植技术手段,这对于国内藏红花引种具有借鉴意义,且为药用领域提供了优质资源。
  参考文献
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