人成骨细胞体外培养、鉴定及护骨素表达的研究

来源 :中国骨质疏松杂志 | 被引量 : 0次 | 上传用户:gaolaoshi
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目的 用酶消化法从正常人松质骨中分离成骨细胞 ,进行体外培养和功能鉴定 ,观察用 1 7β 雌二醇 (1 7β E2 )和雌激素受体拮抗剂ICI1 82 780处理后 ,成骨细胞中护骨素 (OPG)的表达变化。方法 用胰酶 -胶原酶消化法从正常人松质骨中分离培养成骨细胞 ,I型胶原染色用VanGie son法 ,钙化结节用茜素红染色 ,用钙钴法显示成骨细胞中碱性磷酸酶的表达 ,骨钙素和OPG基因的表达用RT -PCR检测 ,OPG蛋白用WesternBlot检测。结果 用酶消化法分离的人成骨细胞 ,在体外培养时可维持合成I型胶原、碱性磷酸酶、骨钙素 ,并形成钙化结节等功能 ;体外培养的人成骨细胞表达OPG ,1 7β E2 上调其表达 ,并能被雌激素受体拮抗剂ICI1 82 780阻断。结论 用酶消化法进行人成骨细胞培养 ,方便易行 ,可培养大量高纯度人成骨细胞供研究使用 ;1 7β E2 上调OPG表达 ,而绝经后雌激素缺乏时 ,OPG的表达相应减少 ,可能是骨质疏松的发病因素之一。
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