基于转化生长因子-β1(TGF-β1)/Smads信号通路探讨肉苁蓉苯乙醇总苷(CPhGs)对人增生性瘢痕成纤维细胞(HSFbs)作用的机制。
方法人增生性瘢痕组织标本来自新疆医科大学第一附属医院2019年3月至6月收治的9例需要手术的增生性瘢痕患者,采用组织块培养法分离后传代培养人增生性瘢痕成纤维细胞,随机分为空白组、模型组(TGF-β1)、阳性对照组(TGF-β1+5-氟尿嘧啶)、实验组(TGF-β1+CPhGs),通过细胞计数试剂盒(CCK-8)检测不同浓度CPhGs对HSFbs增殖的影响;实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)检测各组中Smad2、Smad3、Smad7、Ⅰ型胶原(COL-1)和Ⅲ型胶原(COL-3)的mRNA的表达;蛋白质印迹法(Western blot)检测各组中Smad2、Smad3、磷酸化Smad2(p-Smad2)、磷酸化Smad3(p-Smad3)、Smad7、COL-1和COL-3蛋白的表达,多组间比较采用单因素方差分析。
结果60、90、120 mg/L CPhGs作用于成纤维细胞48 h后抑制率为[(36.87±0.06比43.52±0.04比78.11±0.03)%,F=45.073,P<0.01],CPhGs对细胞的抑制作用随干预时间的延长和药物浓度的增加而增强;RT-qPCR结果显示,实验组和阳性对照组COL-1、COL-3、Smad2、Smad3 mRNA表达低于模型组,Smad7 mRNA表达明显高于模型组,差异有统计学意义(0.21±0.04比0.3±0.25比1.56±0.01,F=39.755,P<0.01)、(0.55±0.04比0.27±0.04比1.66±0.22,F=61.997,P<0.01)、(0.55±0.03比0.78±0.76比1.06±0.15,F=17.769,P<0.01)、(0.46±0.08比0.55±0.10比2.05±0.29,F=56.796,P<0.01)、(1.77±0.59比0.11±0.02比0.04±0.04,F=14.780,P<0.05);Western blot结果显示:实验组和阳性对照组p-Smad2、p-Smad3、COL-1、COL-3蛋白表达低于模型组,Smad7蛋白表达明显高于模型组(0.16±0.03比0.11±0.02比0.06±0.00)、(0.12±0.02比0.07±0.01比0.04±0.01,F=7.670,P<0.05)、(0.27±0.02比0.08±0.01比0.05±0.04,F=34.291,P<0.01)、(0.33±0.02比0.16±0.02比0.17±0.01,F=16.322,P<0.01)、(0.12±0.03比0.15±0.06比0.23±0.05,F=3.936,P<0.05),组间比较差异有统计学意义。
结论CPhGs的可通过阻断TGF-β/Smad信号通路进而抑制HSFbs活化和增殖。