【摘 要】
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目的 :探讨Kinectin的抗原性 ,为下一步研究Kinectin在白塞氏病中的意义奠定基础。方法 :从人Hep2细胞抽提RNA ,利用RT PCR扩增能覆盖Kinectin全长的 3个片段 ,其位置分别相
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目的 :探讨Kinectin的抗原性 ,为下一步研究Kinectin在白塞氏病中的意义奠定基础。方法 :从人Hep2细胞抽提RNA ,利用RT PCR扩增能覆盖Kinectin全长的 3个片段 ,其位置分别相当于氨基酸 2 2～ 5 10 (kin 5 ) ,5 0 3～ 994 (kin M)和 92 0～1346 (kin 3)。将扩增的PCR片段克隆到pET4 2 a(+)载体中 ,诱导表达的融合蛋白用白塞氏病病人血清进行Westernblot分析。结果 :构建的 3个表达Kinectin部分片段载体 (pET kin 5、pET kin M和pET Kin 3)具有正确的阅读框架 ,DNA测序符合率为99 % ,能在大肠杆菌中表达相应的肽段。 8份阳性血清中 ,用Westernblot分析发现 ,6份血清与kin M反应 ,5份血清与kin 3反应 ,只有一份血清与kin 5有反应。结论 :成功地构建表达覆盖Kinectin全长的 3个载体 ,并初步发现Kinectin的抗原性可能主要位于其中间段和羧基端。
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