筛选家蚕分子标记的有效方法-SADF法

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从家蚕品种C108和大造后部丝腺提取的基因组DNA用PstⅠ酶解后与自行设计的人工接头相连,并用与人工接头序列相匹配的选择性引物进行选择性PCR扩增(Selective Amplification).扩增产物经琼脂糖凝胶电泳检测显示,用SADF法在两品种中能检测到稳定的DNA多态性片段,表明此方法可用于分子标记的筛选.经研究发现:当PCR反应体系中Mg2+为1.5mmol/L,dNTPs为200μmol/L,引物为1μmol/L时可得到较好的结果;在热循环过程中,以56℃退火为宜;扩增反应对模板DNA质的要求远胜于量.
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