【摘 要】
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目的研究高糖高脂对小鼠心脏微血管内皮细胞(MCMECs)的影响以及线粒体外膜转运蛋白70(Tom70)的作用,并探讨相关机制。方法将MCMECs分为正常糖组(NG组,给予5.5mmol/L葡萄糖)、
【机 构】
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陆军军医大学(第三军医大学)研究生院; 成都军区总医院心内科;
【基金项目】
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四川省杰出青年基金(2017JQ0012);国家自然科学基金青年科学基金(81500208);中国博士后科学基金(2017M613429);博士后启动基金(41732BA)~~
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目的研究高糖高脂对小鼠心脏微血管内皮细胞(MCMECs)的影响以及线粒体外膜转运蛋白70(Tom70)的作用,并探讨相关机制。方法将MCMECs分为正常糖组(NG组,给予5.5mmol/L葡萄糖)、高糖组(HG组,给予25mmo1/L葡萄糖)和高糖高脂组(HG+HF组,给予25mmo1/L葡萄糖以及500μmol/L混合脂肪酸)。采用Tom70 siRNA敲低MCMECs中Tom70的表达,进一步将HG+HF组分为对照组(Control组仅转染试剂)、阴性对照siRNA组(Negative siRNA组,转染非特异性阴性Scramble siRNA)和Tom70-siRNA组。为探索Tom70在高糖高脂诱导的MCMECs损伤中的可能作用机制,将Tom70-siRNA组分为不含N-乙酰半胱氨酸(NAC)组和含NAC组。通过流式细胞仪检测各组细胞凋亡水平,ELISA试剂盒测定MCMECs中一氧化氮(NO)的生成,RT-q PCR和免疫荧光检测MCMECs中Tom70的表达变化,DHE染色法与ELISA法测定细胞内活性氧簇(ROS)的水平。结果高糖可增加MCMECs的凋亡、减少NO生成,而合并高脂可加重这些损伤(P<0.05)。高糖可抑制MCMECs中Tom70的表达,促进ROS生成(P<0.05);与HG组相比,高糖合并高脂可进一步抑制Tom70的表达,同时显著增加了ROS的生成(P<0.05)。更重要的是,与Control组和Negative siRNA组相比,Tom70-siRNA组胞内ROS含量和细胞凋亡率增加,NO生成显著减少(P<0.01)。与此相反,在此基础上加用抗氧化剂NAC部分逆转了上述MCMECs损伤(P<0.05)。结论高脂会进一步加重糖尿病MCMECs损伤,Tom70可能通过抑制氧化应激反应在糖尿病心脏微血管内皮损伤中发挥作用。
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