【摘 要】
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目的 构建转化生长因子-β2(TGF-β2)基因3’UTR双荧光素酶报告质粒,分析microRNA-212-3p(miR-212-3p)与其潜在靶基因TGF-β2的靶向关系.方法 将TGF-β23’UTR片段构建至双荧
【机 构】
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新疆医科大学 中心实验室,新疆 乌鲁木齐 830011;新疆医科大学第五临床医学院,新疆 乌鲁木齐 830011;新疆医科大学基础医学院组织胚胎学教研室,新疆 乌鲁木齐 830011
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目的 构建转化生长因子-β2(TGF-β2)基因3’UTR双荧光素酶报告质粒,分析microRNA-212-3p(miR-212-3p)与其潜在靶基因TGF-β2的靶向关系.方法 将TGF-β23’UTR片段构建至双荧光素酶报告载体pYr-MirTarget上,随后将重组质粒与miR-212-3p核苷类、无核苷类及其抑制剂共同转染Saos-2细胞(人成骨肉瘤细胞),通过双荧光素酶报告系统检测荧光素酶活性,RT-PCR检测Hsa-miR-212及TGF-β2基因的mRNA相对表达量,Western blotting检测TGF-β2蛋白相对表达量.结果 miR-212-3p-mimics+TGF-β23’UTR共转染组荧光素酶活性较对照组低(P<0.05).miR-212-3p-mimics+TGF-β23’UTR共转染组Has-miR-212 mRNA相对表达量最高,miR-212-3p-inhibitor+TGF-β23’UTR共转染组最低(P<0.05).miR-212-3p-mimics+TGF-β23’UTR共转染组TGF-β2 mRNA相对表达量最低,miR-212-3p-inhibitor+TGF-β23’UTR共转染组最高(P<0.05).miR-212-3p-inhibitor+TGF-β23’UTR共转染组TGF-β2蛋白相对表达量最高,miR-212-3p-mimics+TGF-β23’UTR共转染组最低(P<0.05).结论 该实验成功构建了TGF-β2基因3’UTR荧光素酶重组质粒,而且miR-212-3p可以与TGF-β2基因的3’UTR结合,抑制荧光素酶活性,由此推断TGF-β2是miR-212-3p的靶基因.
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