【摘 要】
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目的通过体外复性和纯化技术获得具有高纯度、高生物活性的重组人铜锌超氧化物歧化酶(rhCu,Zn-SOD),并研究复性蛋白的稳定性。方法以透析法对在大肠杆菌中以包含体形式表达的
【基金项目】
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河北省教育厅科学研究计划资助项目(2006308);河北省科技攻关项目(06276455);河北省生物工程重点学科资助项目(200500021)
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目的通过体外复性和纯化技术获得具有高纯度、高生物活性的重组人铜锌超氧化物歧化酶(rhCu,Zn-SOD),并研究复性蛋白的稳定性。方法以透析法对在大肠杆菌中以包含体形式表达的rhCu,Zn-SOD进行复性,采用金属螯合亲和层析对复性样品进行纯化,通过酶活性测定考查复性和纯化的rhCu,Zn-SOD的热稳定性、pH稳定性和对变性剂的稳定性。结果建立了体外透析复性的基本条件,其比活可达2 380 U.mg-1。该复性样品经金属螯合亲和层析纯化后,结果得到纯度大于95%、比活5 000 U.mg-1、活性回收率大于100%的目的蛋白。复性和纯化蛋白在温度25~70℃和pH 5.0~10.5内活性稳定,并可耐受2~10 mol.L-1的尿素和2%~8%的十二烷基硫酸钠(SDS),对更强烈的变性剂盐酸胍稳定性较弱。结论确定了重组人Cu,Zn-SOD包含体的体外复性条件和复性蛋白纯化方法,且复性蛋白表现出很好的稳定性,为重组人Cu,Zn-SOD的生产奠定了良好基础。
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