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摘要：探讨丙型肝炎患者体内HCV-RNA、HCV-Ab、ALT和TP间的相互关系。采用ELISA检测708例HCV-Ab阳性的丙型肝炎疑似患者，以RT-PCR检测血清HCV-RNA载量，全自动生化仪定量检测ALT和TP。HCV-Ab表达水平与HCV-RNA载量有关，HCV-RNA载量与ALT异常率呈正相关性，但HCV-RNA载量与ALT含量无相关性，与TP含量亦无相关性。708例HCV-Ab阳性患者中男性多于女性，差异无统计学意义（P>0.05）；40岁以上患者比例多于40岁以下患者比例，差异有统计学意义（P<0.05）。HCV-RNA与HCV-Ab、ALT具有一定相关性，丙型肝炎以40岁以上男性患者多见，应引起临床重视。
关键词：HCV-RNA；HCV-Ab；ALT；TP；相关性
中图分类号：R51263文献标志码：A
文章编号：1672-1098（2015）01-0078-05
丙型病毒性肝炎，是一种由丙型肝炎病毒（hepatitis C virus，HCV）感染引起的病毒性肝炎。据世界卫生组织统计，全球HCV的感染率约为3%，约18亿人感染HCV，每年新发丙型肝炎病例约35万例，呈现全球流行趋势。其中50%～85%感染者发展为慢性丙型肝炎，lO%～30%发展为肝硬化，肝硬化患者中约3%～10%可演变为肝细胞癌[1]。近年来HCV感染人数持续上升，成为日趋严重的社会和公共卫生问题。临床实验室多采用实时荧光（RT-PCR）法检测血液中的HCV-RNA用于HCV感染诊断、丙型肝炎患者抗病毒药物疗效监测及血液筛查[2]。本研究对本院2011～2013年疑似丙肝患者的HCV-RNA、HCV-Ab、ALT及TP监测指标进行分析，对其相关性进行研究，探讨其在丙型肝炎诊断和治疗疗效方面的临床意义。
1对象及方法
1.1对象
选取本院2011～2013年度共708例住院及门诊患者HCV-Ab阳性、伴随典型临床表现并已排除其他肝炎的可疑丙型肝炎患者血样。其中男444例、女264例，男性年龄1～95岁，平均年龄455岁，女性年龄10～73岁，平均年龄451岁。
1.2试剂与仪器
1） 丙型肝炎病毒核酸扩增（PCR）荧光定量检测试剂：上海科华生物工程有限公司生产，批号分别为20121206、20131201。 仪器采用罗氏Light Cycler480荧光定量PCR仪，Agilent Technologies扩增仪。
2） 丙型肝炎病毒抗体检测试剂盒（ELISA）：广州中山生物工程有限公司生产，批号分别为20121205、20131203。仪器采用科华KHB ST-360酶标仪。
3） 谷丙转氨酶（ALT）和总蛋白（TP）试剂：SIEMENS有限公司生产，批号分别为20121117、20131201。仪器采用德国SIEMENS Dimension RxL Max全自动生化分析仪。
1.3方法
1） HCV-RNA检测。采用实时荧光RT-PCR法，由PCR实验室人员严格按照试剂盒说明书进行荧光定量检测，在实验中设置阴性对照、强阳性对照、弱阳性对照以及4个不同浓度的标准品（2×104～2×107），HCV-RNA值<10×103 IU/mL为检测下限（不同HCV-RNA检测方法可用IU/mL和copy/mL两种单位，换算公式：IU/mL=0854×copy/mL+0538）。本实验选用试剂盒采用定量单位为IU/mL。
2） HCV-Ab检测。采用ELISA法，由实验室人员严格按照试剂盒说明书进行定性检测，实验中设置一孔阴性对照、一孔空白对照及一孔阳性对照。酶标仪采用450 nm/630 nm双波长检测吸光度（A）。试剂盒阴性对照A值≤01，阳性对照A值≥06，临界值（Cut-off值）计算：Cut-off值=015+阴性对照A值均值。通过与阴性对照、空白对照、阳性对照的Cutoff值比较判断样本A值 3） ALT检测。采用SIEMENS Dimension RxL Max全自动生化分析仪的酶速率法， ALT<40U/L为正常合格。
4） TP检测。采用SIEMENS Dimension RxL Max全自动生化分析仪的双缩脲比色法，TP<80g/L为正常合格。
1.4统计学方法
应用SPSS130统计软件包分析，均值比较用t检验，以P<005为差异有统计学意义。
2结果
1） 708例HCV-Ab阳性患者HCV-RNA 的检测结果：708例HCV-Ab阳性患者中，HCV-RNA值10×103者为504例，HCV-RNA阳性率为712%。HCV-RNA值<10×103者为204例。504例HCV-RNA值10×103者中数量级107为42例、106为174例、105为156例、104为90例、103为42例，经统计计算两种检测方法的差异有统计学意义（χ2=39723，P=0005<005）。
2） 708例HCV-Ab阳性患者的HCV-RNA含量与ALT、TP平均值之间的关系如表1～表2所示，在708例HCV-Ab阳性患者中ALT异常人数所占百分比随着HCV-RNA载量的增加呈依次递增的趋势，与HCV-RNA成正相关性（r=0837，P=001<005）， 但HCV-RNA载量与ALT平均值不构成正相关性（r=0112， P=060>005）。708例HCV-Ab阳性患者中HCV-RNA载量与TP异常的人数所占百分比未有相关性（r=-0233，P=173>005），且随着HCV-RNA载量的增加，相应的TP平均值呈在正常范围值内的负相关（r=-0827，P=000），不同HCV-RNA载量的标本的TP平均值变化较平稳。 表1708例HCV-Ab阳性患者的HCV-RNA载量与ALT、TP的平均值
HCV-RNA/（IU/mL）HCV-AbALT平均值/（U/L）TP平均值/（g/L）
107阳性56505762
106阳性69736022
105阳性49816382
104阳性55446409
103阳性49436631
<103阳性67916576
注：应用SPSS130统计软件统计分析，HCV-RNA载量与ALT平均值比较，r=0112， P=060>005； HCV-RNA载量与TP平均值比较，r=-0827， P=000。
3） 708例HCV-Ab阳性患者的HCV-RNA载量与性别、年龄之间的相关性分析如表3所示，708例HCV-Ab阳性患者的HCV-RNA载量与平均年龄之间并无明显关系，且随着HCV-RNA载量的增加，男性所占比例、女性所占比例及40岁以上患者所占比例、40岁以下患者所占比例未呈规律性变化。但在总体HCV-Ab阳性患者中，男性患者的比例627%要大于女性患者的比例373%，但差异无统计学意义（P>005）；40岁以上患者的比例为692%高于40岁以下患者的比例308%，差异有统计学意义（P<005）。其中40岁以上男性患者人数为392人，所占比例为5537%。
表2708例HCV-Ab阳性患者的HCV-RNA载量与ALT、TP异常人数百分率
HCV-RNA/（IU/mL）HCV-AbALT异常/例ALT正常/例TP异常/例TP正常/例
107阳性30（71.4%）12（28.6%）0（0.00%）42（100.0%）
106阳性102（58.6%）72（41.4%）0（0.00%）174（100.0%）
105阳性75（48.1%）81（51.9%）15（9.60%）141（90.4%）
104阳性43（47.8%）47（52.2%）12（13.3%）78（86.7%）
103阳性12（28.6%）30（71.4%）6（14.3%）36（85.7%）
<103阳性42（20.6%）162（79.4%）12（5.90%）192（94.1%）
合计阳性304（42.9%）404（57.1%）45（6.35%）663（93.7%）
注：应用SPSS130统计软件两分量间的关联统计分析，HCV-RNA载量与ALT异常的人数所占百分比比较，r=0837，P=001<005；HCV-RNA载量与TP异常的人数所占百分比比较，r=-0233，P=173>005。
表3236例HCV-Ab阳性患者的HCV-RNA载量与性别、年龄之间的关系
HCV-RNA/（IU/mL）平均年龄/岁男性/例女性/例≥40岁/例<40岁/例
10735.0024（57.1%）18（42.9%）30（71.4%）12（28.6%）
10646.50132（75.9%）42（24.1%）125（71.8%）49（28.2%）
10548.3184（53.9%）72（46.1%）116（74.4%）40（25.6%）
10438.3154（60.0%）36（40.0%）51（56.7%）39（43.3%）
10343.1424（57.1%）18（42.9%）30（71.4%）12（28.6%）
<10342.77126（61.8%）78（38.2%）138（67.6%）66（32.4%）
合计45.29444（62.7%）264（37.3%）490（69.2%）218（30.8%）
注： 应用SPSS130统计软件两分量间的关联统计分析， 男性患者比例与女性患者比例比较， r=-0986，P=050>005； 40岁以上患者比例与40岁以下患者比例比较，r=0493，P=003<005。
3讨论
1） HCV是丙型肝炎的病因，目前所用实验室诊断方法主要为病原抗原检测、病原抗体检测和HCV-RNA检测。由于采用实时荧光RT-PCR方法检测HCV-RNA可以缩短检测窗口期（最少可至22天）[3]，所以血液中HCV-RNA的实时荧光RT-PCR检测，已成为HCV感染诊断、丙型肝炎患者抗病毒药物治疗疗效监测及血液筛查的重要手段。本研究708例HCV-Ab阳性患者中有204例HCV-RNA值为阴性，分析原因如下：①HCV-Ab假阳性，可能与高球蛋白血症[4]或试剂盒包被抗原不纯[5]等因素导致；②HCV感染后的病毒血症分为持续、一过和间隙三种时间模式[6]。故HCV-RNA出现间隙阴性，或是患者处于疾病恢复期，病毒量下降导致HCV-RNA阴性，而HCV-Ab阳性持续存在；③因实时荧光RT-PCR法提取HCV-RNA过程较复杂，易被RNA酶降解，从而影响低载量的HCV-RNA的检测[7]；④因核酸的稳定性较抗体低，故HCV-RNA不稳定，导致HCV-RNA检出值不稳定[8]，影响实验结果；⑤抗病毒治疗导致干扰和抑制了患者体内HCV-RNA的复制，使得血清中HCV-RNA的载量低于检测下限[9]。
2） 由表1、表2看出，随着HCV-RNA值的升高ALT的平均值未呈比例升高，但ALT异常人数所占百分比升高，与HCV-RNA值呈正相关（r=0837，P<005），提示肝细胞发生损伤，但不能反映肝脏的损伤程度[10]。但据澳大利亚的一项实验调查研究证明HCV-RNA和ALT的水平动态变化在感染的前三至五个月有相互影响作用，在感染的早期治疗有重要的作用[11]。故在以后的研究中需进一步收集临床资料验证丙型肝炎早期感染阶段的指标动态变化的影响意义。 3） 急慢性肝病会造成总蛋白偏高，但在708例HCV-Ab阳性患者中，TP平均值变化较平稳，且都在正常范围内，TP异常较集中在HCV-RNA值为103～105范围内，说明TP异常常伴随低HCV-RNA含量时存在，可能与丙型肝炎早期肝细胞纤维化、炎症和代谢失常有关。
4） 在本研究中，708例HCV-Ab阳性患者的HCV-RNA的含量与平均年龄、性别之间有一定联系。在总体HCV-Ab阳性患者中，男性患者的比例要大于女性患者，差异无统计学意义（P>005）。据国外报道称女性献血者的丙肝感染率远低于男性献血者[12]，故考虑在以后的研究中增大标本量进行统计研究；40岁以上患者的比例要大于40岁以下患者的比例，差异有统计学意义（P<005）。本研究数据表明，丙型肝炎患者以40岁以上男性居多，可能由于年龄大机体老化导致机体免疫力下降或因40岁以上男性社会压力大及饮酒、吸烟等不良生活习惯或合并其他疾病并发症致使机体抵抗力下降易受病毒侵害[13]。据美国全国健康和营养检查调查显示：40岁以上成年人的丙型感染率明显增高，且273%的40岁以上丙肝患者中有过量饮酒史，酒精对于HCV感染具有乘法效应[14]。
综上所述，RT-PCR检测血液中的HCV-RNA由于其窗口期短、定量监测病毒复制量，较好地应用于HCV的诊断，药物治疗疗效监测，但不能确切反映病理性肝损伤。ELISA法检测HCV-Ab由于其操作简单、成本经济、检出率高等特点用于大规模的人群筛查指标，但其窗口期长且易出现假阳性。ALT和TP在丙肝感染的过程中一定程度上反映了肝脏的损伤情况，与丙肝的感染阶段有一定关联。因此需结合HCV-RNA、HCV-Ab、ALT和TP对丙型肝炎患者进行病情的诊断、检测和治疗。本研究中丙型肝炎以40岁以上男性患者多见，故应增加临床重视度。
参考文献：
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[13]刘贤华，白晓东，刘元明，等. 丙型肝炎病毒核酸定量和抗-HCV血清学分析的诊断价值[J]. 武警医学，2013，24（6）：489-490.
[14]LIU G， HOLMBERG SD， KAMILI S，et al. Racial disparities in the proportion of current， unresolved hepatitis C virus infections in the United States， 2003-2010 [J]. Digestive diseases and sciences 2014，59（8）：1 950-1 957.
（责任编辑：何学华）
关键词：HCV-RNA；HCV-Ab；ALT；TP；相关性
中图分类号：R51263文献标志码：A
文章编号：1672-1098（2015）01-0078-05
丙型病毒性肝炎，是一种由丙型肝炎病毒（hepatitis C virus，HCV）感染引起的病毒性肝炎。据世界卫生组织统计，全球HCV的感染率约为3%，约18亿人感染HCV，每年新发丙型肝炎病例约35万例，呈现全球流行趋势。其中50%～85%感染者发展为慢性丙型肝炎，lO%～30%发展为肝硬化，肝硬化患者中约3%～10%可演变为肝细胞癌[1]。近年来HCV感染人数持续上升，成为日趋严重的社会和公共卫生问题。临床实验室多采用实时荧光（RT-PCR）法检测血液中的HCV-RNA用于HCV感染诊断、丙型肝炎患者抗病毒药物疗效监测及血液筛查[2]。本研究对本院2011～2013年疑似丙肝患者的HCV-RNA、HCV-Ab、ALT及TP监测指标进行分析，对其相关性进行研究，探讨其在丙型肝炎诊断和治疗疗效方面的临床意义。
1对象及方法
1.1对象
选取本院2011～2013年度共708例住院及门诊患者HCV-Ab阳性、伴随典型临床表现并已排除其他肝炎的可疑丙型肝炎患者血样。其中男444例、女264例，男性年龄1～95岁，平均年龄455岁，女性年龄10～73岁，平均年龄451岁。
1.2试剂与仪器
1） 丙型肝炎病毒核酸扩增（PCR）荧光定量检测试剂：上海科华生物工程有限公司生产，批号分别为20121206、20131201。 仪器采用罗氏Light Cycler480荧光定量PCR仪，Agilent Technologies扩增仪。
2） 丙型肝炎病毒抗体检测试剂盒（ELISA）：广州中山生物工程有限公司生产，批号分别为20121205、20131203。仪器采用科华KHB ST-360酶标仪。
3） 谷丙转氨酶（ALT）和总蛋白（TP）试剂：SIEMENS有限公司生产，批号分别为20121117、20131201。仪器采用德国SIEMENS Dimension RxL Max全自动生化分析仪。
1.3方法
1） HCV-RNA检测。采用实时荧光RT-PCR法，由PCR实验室人员严格按照试剂盒说明书进行荧光定量检测，在实验中设置阴性对照、强阳性对照、弱阳性对照以及4个不同浓度的标准品（2×104～2×107），HCV-RNA值<10×103 IU/mL为检测下限（不同HCV-RNA检测方法可用IU/mL和copy/mL两种单位，换算公式：IU/mL=0854×copy/mL+0538）。本实验选用试剂盒采用定量单位为IU/mL。
2） HCV-Ab检测。采用ELISA法，由实验室人员严格按照试剂盒说明书进行定性检测，实验中设置一孔阴性对照、一孔空白对照及一孔阳性对照。酶标仪采用450 nm/630 nm双波长检测吸光度（A）。试剂盒阴性对照A值≤01，阳性对照A值≥06，临界值（Cut-off值）计算：Cut-off值=015+阴性对照A值均值。通过与阴性对照、空白对照、阳性对照的Cutoff值比较判断样本A值
4） TP检测。采用SIEMENS Dimension RxL Max全自动生化分析仪的双缩脲比色法，TP<80g/L为正常合格。
1.4统计学方法
应用SPSS130统计软件包分析，均值比较用t检验，以P<005为差异有统计学意义。
2结果
1） 708例HCV-Ab阳性患者HCV-RNA 的检测结果：708例HCV-Ab阳性患者中，HCV-RNA值10×103者为504例，HCV-RNA阳性率为712%。HCV-RNA值<10×103者为204例。504例HCV-RNA值10×103者中数量级107为42例、106为174例、105为156例、104为90例、103为42例，经统计计算两种检测方法的差异有统计学意义（χ2=39723，P=0005<005）。
2） 708例HCV-Ab阳性患者的HCV-RNA含量与ALT、TP平均值之间的关系如表1～表2所示，在708例HCV-Ab阳性患者中ALT异常人数所占百分比随着HCV-RNA载量的增加呈依次递增的趋势，与HCV-RNA成正相关性（r=0837，P=001<005）， 但HCV-RNA载量与ALT平均值不构成正相关性（r=0112， P=060>005）。708例HCV-Ab阳性患者中HCV-RNA载量与TP异常的人数所占百分比未有相关性（r=-0233，P=173>005），且随着HCV-RNA载量的增加，相应的TP平均值呈在正常范围值内的负相关（r=-0827，P=000），不同HCV-RNA载量的标本的TP平均值变化较平稳。 表1708例HCV-Ab阳性患者的HCV-RNA载量与ALT、TP的平均值
HCV-RNA/（IU/mL）HCV-AbALT平均值/（U/L）TP平均值/（g/L）
107阳性56505762
106阳性69736022
105阳性49816382
104阳性55446409
103阳性49436631
<103阳性67916576
注：应用SPSS130统计软件统计分析，HCV-RNA载量与ALT平均值比较，r=0112， P=060>005； HCV-RNA载量与TP平均值比较，r=-0827， P=000。
3） 708例HCV-Ab阳性患者的HCV-RNA载量与性别、年龄之间的相关性分析如表3所示，708例HCV-Ab阳性患者的HCV-RNA载量与平均年龄之间并无明显关系，且随着HCV-RNA载量的增加，男性所占比例、女性所占比例及40岁以上患者所占比例、40岁以下患者所占比例未呈规律性变化。但在总体HCV-Ab阳性患者中，男性患者的比例627%要大于女性患者的比例373%，但差异无统计学意义（P>005）；40岁以上患者的比例为692%高于40岁以下患者的比例308%，差异有统计学意义（P<005）。其中40岁以上男性患者人数为392人，所占比例为5537%。
表2708例HCV-Ab阳性患者的HCV-RNA载量与ALT、TP异常人数百分率
HCV-RNA/（IU/mL）HCV-AbALT异常/例ALT正常/例TP异常/例TP正常/例
107阳性30（71.4%）12（28.6%）0（0.00%）42（100.0%）
106阳性102（58.6%）72（41.4%）0（0.00%）174（100.0%）
105阳性75（48.1%）81（51.9%）15（9.60%）141（90.4%）
104阳性43（47.8%）47（52.2%）12（13.3%）78（86.7%）
103阳性12（28.6%）30（71.4%）6（14.3%）36（85.7%）
<103阳性42（20.6%）162（79.4%）12（5.90%）192（94.1%）
合计阳性304（42.9%）404（57.1%）45（6.35%）663（93.7%）
注：应用SPSS130统计软件两分量间的关联统计分析，HCV-RNA载量与ALT异常的人数所占百分比比较，r=0837，P=001<005；HCV-RNA载量与TP异常的人数所占百分比比较，r=-0233，P=173>005。
表3236例HCV-Ab阳性患者的HCV-RNA载量与性别、年龄之间的关系
HCV-RNA/（IU/mL）平均年龄/岁男性/例女性/例≥40岁/例<40岁/例
10735.0024（57.1%）18（42.9%）30（71.4%）12（28.6%）
10646.50132（75.9%）42（24.1%）125（71.8%）49（28.2%）
10548.3184（53.9%）72（46.1%）116（74.4%）40（25.6%）
10438.3154（60.0%）36（40.0%）51（56.7%）39（43.3%）
10343.1424（57.1%）18（42.9%）30（71.4%）12（28.6%）
<10342.77126（61.8%）78（38.2%）138（67.6%）66（32.4%）
合计45.29444（62.7%）264（37.3%）490（69.2%）218（30.8%）
注： 应用SPSS130统计软件两分量间的关联统计分析， 男性患者比例与女性患者比例比较， r=-0986，P=050>005； 40岁以上患者比例与40岁以下患者比例比较，r=0493，P=003<005。
3讨论
1） HCV是丙型肝炎的病因，目前所用实验室诊断方法主要为病原抗原检测、病原抗体检测和HCV-RNA检测。由于采用实时荧光RT-PCR方法检测HCV-RNA可以缩短检测窗口期（最少可至22天）[3]，所以血液中HCV-RNA的实时荧光RT-PCR检测，已成为HCV感染诊断、丙型肝炎患者抗病毒药物治疗疗效监测及血液筛查的重要手段。本研究708例HCV-Ab阳性患者中有204例HCV-RNA值为阴性，分析原因如下：①HCV-Ab假阳性，可能与高球蛋白血症[4]或试剂盒包被抗原不纯[5]等因素导致；②HCV感染后的病毒血症分为持续、一过和间隙三种时间模式[6]。故HCV-RNA出现间隙阴性，或是患者处于疾病恢复期，病毒量下降导致HCV-RNA阴性，而HCV-Ab阳性持续存在；③因实时荧光RT-PCR法提取HCV-RNA过程较复杂，易被RNA酶降解，从而影响低载量的HCV-RNA的检测[7]；④因核酸的稳定性较抗体低，故HCV-RNA不稳定，导致HCV-RNA检出值不稳定[8]，影响实验结果；⑤抗病毒治疗导致干扰和抑制了患者体内HCV-RNA的复制，使得血清中HCV-RNA的载量低于检测下限[9]。
2） 由表1、表2看出，随着HCV-RNA值的升高ALT的平均值未呈比例升高，但ALT异常人数所占百分比升高，与HCV-RNA值呈正相关（r=0837，P<005），提示肝细胞发生损伤，但不能反映肝脏的损伤程度[10]。但据澳大利亚的一项实验调查研究证明HCV-RNA和ALT的水平动态变化在感染的前三至五个月有相互影响作用，在感染的早期治疗有重要的作用[11]。故在以后的研究中需进一步收集临床资料验证丙型肝炎早期感染阶段的指标动态变化的影响意义。 3） 急慢性肝病会造成总蛋白偏高，但在708例HCV-Ab阳性患者中，TP平均值变化较平稳，且都在正常范围内，TP异常较集中在HCV-RNA值为103～105范围内，说明TP异常常伴随低HCV-RNA含量时存在，可能与丙型肝炎早期肝细胞纤维化、炎症和代谢失常有关。
4） 在本研究中，708例HCV-Ab阳性患者的HCV-RNA的含量与平均年龄、性别之间有一定联系。在总体HCV-Ab阳性患者中，男性患者的比例要大于女性患者，差异无统计学意义（P>005）。据国外报道称女性献血者的丙肝感染率远低于男性献血者[12]，故考虑在以后的研究中增大标本量进行统计研究；40岁以上患者的比例要大于40岁以下患者的比例，差异有统计学意义（P<005）。本研究数据表明，丙型肝炎患者以40岁以上男性居多，可能由于年龄大机体老化导致机体免疫力下降或因40岁以上男性社会压力大及饮酒、吸烟等不良生活习惯或合并其他疾病并发症致使机体抵抗力下降易受病毒侵害[13]。据美国全国健康和营养检查调查显示：40岁以上成年人的丙型感染率明显增高，且273%的40岁以上丙肝患者中有过量饮酒史，酒精对于HCV感染具有乘法效应[14]。
综上所述，RT-PCR检测血液中的HCV-RNA由于其窗口期短、定量监测病毒复制量，较好地应用于HCV的诊断，药物治疗疗效监测，但不能确切反映病理性肝损伤。ELISA法检测HCV-Ab由于其操作简单、成本经济、检出率高等特点用于大规模的人群筛查指标，但其窗口期长且易出现假阳性。ALT和TP在丙肝感染的过程中一定程度上反映了肝脏的损伤情况，与丙肝的感染阶段有一定关联。因此需结合HCV-RNA、HCV-Ab、ALT和TP对丙型肝炎患者进行病情的诊断、检测和治疗。本研究中丙型肝炎以40岁以上男性患者多见，故应增加临床重视度。
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（责任编辑：何学华）